目的 研究幽門螺桿菌（Hp）CagA 、OipA、UreB、UreC 4種毒力因子對胃上皮細(xì)胞增殖與凋亡的影響, 旨在尋找Hp的致癌組分, 同時也為這4種毒力因子DNA疫苗的研制提供安全性指標(biāo)。方法 用RT-PCR方法從國際標(biāo)準(zhǔn)株NCTC11637中獲取cagA、ureB 全長基因,克隆入pGEM-T Easy載體并測序,以本次實驗獲得的連接于T 載體上的cagA、ureB及本實驗室曾采用同樣的方法獲得的連接于T 載體上的oipA和 ureC全長基因為模板,將4種基因的開放讀碼框架定向克隆入pcDNA3.1載體,構(gòu)建4種基因的真核重組子;獲得的4種重組子及載體pcDNA3.1以脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞,篩選耐潮霉素的細(xì)胞克隆;用RT-PCR方法檢測細(xì)胞內(nèi)4種基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá),用雞抗OipA抗體、雞抗UreC抗體以Immuno-blot方法檢測OipA和UreC蛋白水平的表達(dá);用熒光染色技術(shù)、MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測各基因的表達(dá)對細(xì)胞表型、增殖、凋亡及生長周期的影響。結(jié)果 成功地構(gòu)建了4種基因的真核重組子pccagA、 pcureB、 pcoipA、pcureC和含相應(yīng)... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ureB、cagA基因測序圖

Immuno-blot 檢測 UreC、OipA 蛋白的表達(dá)AB：：陽性對照組，Hp 水煮蛋白，點樣量 5ul：實驗組，SureC 細(xì)胞裂解物：對照組，SpcDNA3.1 細(xì)胞裂解物：實驗組，SoipA 細(xì)胞裂解物：對照組，SpcDNA3.1 細(xì)胞裂解物、C、D 組 1-4 從左向右點樣量依次為：5ul、10ul、15u

2-1 熒光顯微鏡下 SpcDNA3.1、ScagA、 SureB、 SoipA、SureC 細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征（400×， AO/EB 染色） SpcDNA3.1 ； 2-4 ScagA ； 5 SoipA ； SureB； 7 SureC巨細(xì)胞樣變，↑胞漿空泡樣變，↑異形細(xì)胞，↑胞膜皺縮，↑胞膜突起、出芽

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3369705