本文關(guān)鍵詞：兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學(xué)特性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來(lái),抗生素和免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用以及腸球菌多重耐藥菌株的不斷出現(xiàn),腸球菌引起的醫(yī)院內(nèi)感染逐漸增多。特別是艾滋病人、接受化療的癌癥患者、術(shù)后和器官移植病人易患腸球菌感染。在全球范圍內(nèi),腸球菌感染主要是由糞腸球菌和屎腸球菌引起。研究顯示,腸球菌對(duì)頭孢菌素的固有耐藥性、以及對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥性增加的趨勢(shì),導(dǎo)致腸球菌感染的治療面臨諸多困難。噬菌體是一類(lèi)能夠感染細(xì)菌的病毒,廣泛存在于自然界。利用裂解性噬菌體控制細(xì)菌感染的噬菌體療法又重新引起人們的關(guān)注。因此,積極開(kāi)展腸球菌噬菌體生物學(xué)特性的研究和腸球菌感染的噬菌體療法,具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。 本項(xiàng)研究以12株糞腸球菌和8株屎腸球菌為宿主菌,從醫(yī)院污水站中分離出4株裂解性糞腸球菌噬菌體,分別命名為φEc-ZZ2、φEc-ZZ3、φEc-ZZ7和φEc-ZZ8。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),這4株新分離的噬菌體屬于有尾病毒目(Caudovirale order)中的長(zhǎng)尾病毒科(Siphovridae)噬菌體。我們對(duì)噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究,通過(guò)基因測(cè)序分析了噬菌體φEc-ZZ2的基因組。結(jié)果顯示：(1)噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8的頭部均呈立體對(duì)稱(chēng)、直徑約40nm,尾部呈絲狀、長(zhǎng)約200nm；(2)噬菌體φEc-ZZ2對(duì)20株腸球菌的裂解率為45%,而φ-ZZ8的裂解率為30%；(3)DNA限制性酶切圖譜表明：噬菌體φEc-ZZ2和φ-ZZ8基因組都含有Hind Ⅲ、EcoR Ⅴ、Nde Ⅰ和XbaI的酶切位點(diǎn)；(4)一步生長(zhǎng)曲線表明,噬菌體φEc-ZZ2的潛伏期為10min,爆發(fā)量為100PFU/cell；噬菌體φEc-ZZ8的潛伏期為15min,爆發(fā)量為150PFU/cell；(5)SDS-PAGE蛋白電泳發(fā)現(xiàn),φEc-ZZ2有2條主要蛋白帶和5條次要蛋白帶,φEc-ZZ8有3條主要蛋白帶和至少8種次要蛋白帶,兩株噬菌體的相對(duì)分子質(zhì)量范圍都在10-130kDa之間；(6)在穩(wěn)定性試驗(yàn)中,噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8在60℃30min后以及在pH4～10的范圍內(nèi)仍具有裂解宿主細(xì)胞的活性；(7)基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn),φEc-ZZ2基因組大小為41,170bp,GC含量34.59%。基因組有59個(gè)基因(總長(zhǎng)度為35,760bp,占基因組全長(zhǎng)的86.86%),1個(gè)scaffold,1個(gè)contig,2個(gè)小衛(wèi)星序列,無(wú)微衛(wèi)星序列、無(wú)tRNA和rRNA。 通過(guò)對(duì)分離的糞腸球菌噬菌體的初步研究,獲得以下結(jié)論： 1.糞腸球菌噬菌體φEc-ZZ2、φEc-ZZ3、φEc-ZZ7和φEc-ZZ8為裂解性噬菌體,其形態(tài)學(xué)特征符合有尾病毒目(Caudovirale order)中的長(zhǎng)尾病毒科(Siphoviridae family)噬菌體。 2.噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8所具有的潛伏期短、裂解效率高、寬裂解譜以及在60℃和pH4-10條件下仍具有裂解活性等特征,為噬菌體療法應(yīng)用于耐藥性腸球菌的感染提供了依據(jù)。 3.基因測(cè)序表明,噬菌體φEc-ZZ2基因組為雙鏈DNA,大小為41,170bp,GC含量34.59%。基因組有59個(gè)基因,總長(zhǎng)度為35,760bp。
【關(guān)鍵詞】：噬菌體療法 噬菌體 腸球菌 耐萬(wàn)古霉素腸球菌
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R378.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英語(yǔ)縮寫(xiě)和中英文全稱(chēng)對(duì)照表10-11
• 第1章 文獻(xiàn)回顧11-17
• 1、腸球菌概述11-12
• 2、噬菌體的發(fā)現(xiàn)及初期研究12-15
• 3、其他革蘭陽(yáng)性球菌的噬菌體研究進(jìn)展15-16
• 4、噬菌體研究的發(fā)展前景16-17
• 第2章 兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學(xué)特性分析17-38
• 2.1 材料17-19
• 2.1.1 宿主菌17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要儀器18-19
• 2.2 方法19-24
• 2.2.1 腸球菌的準(zhǔn)備19
• 2.2.2 標(biāo)本的來(lái)源及其處理19
• 2.2.3 腸球菌噬菌體分離19-20
• 2.2.4 噬菌體的擴(kuò)增及滴度的測(cè)定20
• 2.2.5 噬菌體電鏡觀察20-21
• 2.2.6 噬菌體交叉裂解試驗(yàn)21
• 2.2.7 噬菌體穩(wěn)定性試驗(yàn)21
• 2.2.8 噬菌體核酸的提取及酶切分析21-22
• 2.2.9 腸球菌噬菌體的SDS-PAGE凝膠電泳22-23
• 2.2.10 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)的測(cè)定23
• 2.2.11 噬菌體吸收率試驗(yàn)23-24
• 2.2.12 噬菌體一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定24
• 2.3 結(jié)果24-36
• 2.3.1 腸球菌噬菌體的分離及擴(kuò)增24-25
• 2.3.2 噬菌體的電鏡觀察25-27
• 2.3.3 噬菌體的交叉裂解結(jié)果27-28
• 2.3.4 噬菌體的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果分析28-30
• 2.3.5 噬菌體的核酸提取及酶切分析30-31
• 2.3.6 噬菌體蛋白的SDS-PAGE凝膠電泳31-32
• 2.3.7 最佳感染復(fù)數(shù)的測(cè)定32-33
• 2.3.8 噬菌體吸收率曲線的繪制33-34
• 2.3.9 噬菌體一步生長(zhǎng)曲線的繪制34-36
• 2.4 討論36-38
• 第3章 噬菌體φEC-ZZ2的全基因組測(cè)序與分析38-48
• 3.1 測(cè)序樣品的準(zhǔn)備38
• 3.2 樣品φEc-ZZ2的全基因組分析38-48
• 第4章 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 作者簡(jiǎn)介及在讀期間發(fā)表論文和參加課題54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張文惠;安小平;范航;范華昊;李玉元;米志強(qiáng);童貽剛;;一株糞腸球菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性研究[J];生物技術(shù)通訊;2013年04期

  本文關(guān)鍵詞：兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學(xué)特性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：331729