本課題在胡川閩博士構(gòu)建的鼠抗人肝癌單克隆抗體HAb25的部分輕鏈缺失的單鏈抗體的基礎(chǔ)上，以完整的輕鏈可變區(qū)基因替換原部分缺失的輕鏈可變區(qū)基因，重新構(gòu)建了鼠抗人肝癌單鏈抗體（mscFv），將其與檢測標(biāo)簽E-tag偶連并在原核表達(dá)載體pET15b中獲得高效融合表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物（mscFv-E-tag）經(jīng)初步純化后進(jìn)行的活性檢測結(jié)果顯示，mscFv較好地保持了親本抗體HAb25的抗原結(jié)合特異性和親和性。在此基礎(chǔ)上，將mscFv及其經(jīng)過人源化改造的抗人肝癌單鏈抗體（hscFv，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院袁清安博士構(gòu)建）分別與人腫瘤壞死因子α（TNFα）基因偶連，分別構(gòu)建了PGEX 4T-1 m／hscFv-TNFα抗肝癌雙功能抗體的原核融合表達(dá)載體，并實現(xiàn)了高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化后進(jìn)行的活性檢測結(jié)果顯示，m／hscFv-TNFα均保持了親本抗體HAb25的抗原結(jié)合特性，并對靶細(xì)胞（SMMC-7721）具有明確的選擇性殺傷作用，進(jìn)一步的荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠體內(nèi)抑瘤實驗結(jié)果表明，m／hscFv-TNFα均具有明確的導(dǎo)向殺傷作用。 一、抗肝癌單鏈抗體的重新構(gòu)建、表達(dá)及其活性檢測 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

mscFv誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的SDS一PAGE

8.hscFv的活性檢測hsFcv競爭結(jié)合抑制實驗結(jié)果表明hsFcv能與靶細(xì)胞特異性結(jié)合并封閉親本抗體42%的親和活性，SABC法測定結(jié)果與mscFv的結(jié)果一致，表明mscFv人源化后仍較好地保持了親本杭體的特異性和親和活性，具有與mscFv基本相同的活性。

16mscFv誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物SDSPAGE的光密度掃描結(jié)45夕2/seOOBC萬一檔’“嘿一，‘’川路“‘’‘獷能”生貓召圖1.8mscFv的競爭結(jié)合抑制曲線性對照組，B為mscFv封閉實驗組，C為HAb25陽性對

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝癌組合單抗導(dǎo)向治療的實驗研究[J]. 隋延仿,劉利,陳志南,劉彥仿.  中華消化雜志. 1996(S1)
[2]肝癌單抗重鏈可變區(qū)基因的克隆及序列測定[J]. 胡川閩,劉彥仿,高磊,陳蘇民,陳南春,高輝,金衛(wèi)林.  免疫學(xué)雜志. 1996(03)
[3]抗人肝癌單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因克隆和序列測定[J]. 楊萍,劉彥仿,胡川閩,陳志南,隋延仿,陳蘇民,高磊,陳南春,楊安鋼.  中國免疫學(xué)雜志. 1995(01)
[4]兩株新的抗肝細(xì)胞肝癌單克隆抗體的制備及特異性鑒定[J]. 胡川閩,劉彥仿,陳志南,隋延仿,仇凱,徐力青.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 1994(02)
[5]影響大腸桿菌中外源基因表達(dá)的因素[J]. 隋廣超,胡美浩.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1994(02)
[6]肝癌“雙彈頭”免疫導(dǎo)向藥物的實驗研究[J]. 劉利,隋延仿,陳志南,劉彥仿.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 1994(01)
[7]肝動脈注射治療劑量131Ⅰ－抗人肝癌McAb的RⅡ[J]. 施樂華,吳孟超,陳漢,田建明,徐登仁,謝弘,王根鳳,強家模,徐成湯,王放.  中華核醫(yī)學(xué)雜志. 1994(01)
[8]HAb27單抗可變區(qū)基因克隆和序列測定[J]. 楊萍,劉彥仿,胡川閩,陳志南,隋延仿,陳蘇民,高磊,陳南春,楊安鋼.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1994(01)
[9]抗經(jīng)干擾素處理的SMMC7721肝癌細(xì)胞系單克隆抗體HAb23的制備[J]. 姬亞友,劉彥仿,陳志南,隋延仿.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 1990(01)
[10]肝癌單克隆抗體的制備與免疫組化定位[J]. 劉彥仿,朱明華.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 1989(06)



本文編號：3299707