【目的】構(gòu)建在中華按蚊Anopheles sinensis中的電轉(zhuǎn)化顯微注射技術(shù)平臺(tái),并利用該技術(shù)平臺(tái)實(shí)現(xiàn)活體基因瞬時(shí)過表達(dá)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證,為開展系統(tǒng)的基因功能研究奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā恳訡UY21EDITⅡ電轉(zhuǎn)儀為主體構(gòu)建中華按蚊中的電轉(zhuǎn)化顯微注射技術(shù)平臺(tái);使用同源重組法構(gòu)建EGFP和Bm-iAANAT基因的瞬時(shí)過表達(dá)質(zhì)粒,在中華按蚊化蛹3 h時(shí)注射該質(zhì)粒進(jìn)入蛹體,隨即使用電轉(zhuǎn)儀對(duì)注射后的蛹進(jìn)行電擊,待注射個(gè)體發(fā)育至化蛹39 h時(shí),利用體視熒光顯微鏡觀察蛹體表皮著色和發(fā)光情況,并通過熒光定量PCR檢測(cè)EGFP和Bm-iAANAT的表達(dá)�！窘Y(jié)果】構(gòu)建了用于顯微注射的PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40和PIZ-modi-Aepub-AANAT-T2A-EGFP-SV40過表達(dá)載體。PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40注射組中華按蚊在化蛹39 h時(shí)約87.5%的個(gè)體成活并正常黑化,這其中約92.7%的個(gè)體的表皮檢測(cè)到明顯的綠色熒光,注射無啟動(dòng)子載體PIZ-modi-EGFP-SV40并進(jìn)行電擊的陰性對(duì)照組和注射過表達(dá)載體PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40但... 

【文章來源】：昆蟲學(xué)報(bào). 2019,62(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蚊蟲品系
    1.2 電轉(zhuǎn)化顯微注射平臺(tái)的儀器設(shè)備
    1.3 主要試劑與耗材
    1.4 瞬時(shí)過表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.5 顯微注射中華按蚊蛹及電擊操作
    1.6 表型觀察及基因表達(dá)分析
    1.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 中華按蚊電轉(zhuǎn)化顯微注射技術(shù)平臺(tái)的建立
    2.2 瞬時(shí)過表達(dá)載體的構(gòu)建和驗(yàn)證
    2.3 單報(bào)告基因質(zhì)粒在中華按蚊蛹中的表達(dá)
    2.4 雙報(bào)告基因質(zhì)粒在中華按蚊蛹中的表達(dá)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蟲媒疾病傳播媒介的研究進(jìn)展[J]. 王燕紅,鄭愛華,劉起勇,康樂,鄒振.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2017 (03)
[2]轉(zhuǎn)基因蚊最新研究進(jìn)展[J]. 楊頻.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2011(02)
[3]家蠶轉(zhuǎn)基因技術(shù)中若干因素對(duì)轉(zhuǎn)基因效率的影響[J]. 馬三垣,徐漢福,段建平,趙愛春,張美蓉,夏慶友.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(06)

博士論文
[1]家蠶安全高效轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系的研究[D]. 龍定沛.西南大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3281556