目的：用基因工程技術(shù)克隆和表達(dá)H.pylori 的hpaA基因，以純化的重組蛋白為抗原，建立檢測血清HpaA抗體的間接ELISA法，探討以重組蛋白作為抗原在診斷H.pylori感染中的價值。方法：用PCR方法從H.pylori DNA中擴增hpaA基因片段。插入原核表達(dá)載體pQE30，轉(zhuǎn)化受體菌DH5a，克隆及序列分析后在大腸桿菌中進(jìn)行高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化和Western blot鑒定后，作為抗原,建立檢測血清H.pylori HpaA抗體的間接ELISA法，與科研診斷標(biāo)準(zhǔn)比較評價其應(yīng)用的可行性。結(jié)果： 1.重組表達(dá)質(zhì)粒pQE30-hpaA構(gòu)建成功,序列分析所得序列完整，插入的基因片段全長783bp，與基因文庫中的hpaA基因同源性達(dá)97.3%；2. SDS-PAGE顯示表達(dá)產(chǎn)物相對分子量為30 000，表達(dá)量占全菌總量的31.67%；3. Western blot顯示該蛋白可被病人血清所識別；4.SDS-PAGE分析表達(dá)形式，蛋白主要存在于細(xì)菌裂解液上清中，部分存在于包涵體中,經(jīng)Ni2+-NTA樹脂對上清進(jìn)行純化后，可得到純度90%以上的蛋白質(zhì)；5.重組蛋白免疫兔后的免疫血清雙擴... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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第一部分 幽門螺桿菌粘附素hpaA基因的原核表達(dá)及初步應(yīng)用
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 幽門螺桿菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號：3223484