發(fā)布時(shí)間：2017-04-22 20:10

  本文關(guān)鍵詞：8-羥基脫氧鳥嘌呤的選擇性化學(xué)修飾及其納米孔單分子檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：8-羥基脫氧鳥嘌呤(8-oxo G,OG)是由活性氧引發(fā)的最常見的DNA氧化損傷之一,因其體內(nèi)生成量相對較高、存在普遍、穩(wěn)定、能用靈敏度較高的分析方法檢測等特點(diǎn),被視為DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn),人體中OG含量的升高會(huì)誘發(fā)基因突變和提高致癌的風(fēng)險(xiǎn),因此,OG含量的檢測對于疾病的早期檢測和監(jiān)控有著重要的意義。本論文擬將化學(xué)修飾方法與納米孔單分子檢測技術(shù)結(jié)合,使用化學(xué)修飾方法,在單鏈DNA中的OG位點(diǎn)修飾上主客體復(fù)合物,繼而利用納米孔單分子技術(shù),記錄修飾雜化體穿越α-溶血毒素納米孔的電信號,通過特征信號的類型和信號頻率,定性和定量檢測DNA氧化損傷。論文主要內(nèi)容如下:(1)篩選最優(yōu)修飾路線。以高選擇性、高修飾率和高度特征信號為準(zhǔn)則,確定最終修飾路線。修飾路線分兩步完成:首先OG在Na2Ir Cl6催化下與1,12-二氨基十二烷反應(yīng),然后與金剛烷衍生物Ad-C3-NHS發(fā)生酰胺反應(yīng),兩步反應(yīng)均表現(xiàn)較高的修飾率,修飾產(chǎn)物與葫蘆脲[7]共孵育后形成雜化體DNA-Ad?CB[7],利用納米孔單分子技術(shù)進(jìn)行檢測。(2)納米孔單分子實(shí)驗(yàn)得到的特征信號主要有兩部分組成:電流阻滯接近100%、長阻滯時(shí)間的Level 1和電流來回振蕩的Level 2-2’,部分信號還有Level M。該特征信號的產(chǎn)生與?-溶血毒素蛋白的三個(gè)氨基酸有關(guān)。(3)定性和定量檢測OG。通過與普通堿基A、T、G、C的對照組實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)只有OG發(fā)生了化學(xué)反應(yīng),而且與修飾后使用納米孔單分子技術(shù)檢測到的特征信號形成對應(yīng)關(guān)系,因此該方法可用于OG的定性檢測。使用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本建立濃度與特征信號頻率的標(biāo)準(zhǔn)曲線,發(fā)現(xiàn)模擬實(shí)際樣品的信號頻率與之吻合度良好。我們首次使用納米孔單通道技術(shù)得到DNA氧化損傷的定量信息,可檢測的OG最低含量為5%。(4)研究升溫對特征信號的影響。DNA鏈長會(huì)增加Level 1的阻滯時(shí)間,通過升溫的手段縮短Level 1的阻滯時(shí)間,完成長鏈DNA的OG氧化水平的檢測,并嘗試使用升溫對DNA鏈含雙OG氧化水平的檢測。本論文中,我們利用主客體相互作用構(gòu)建了新穎的納米孔傳感平臺,完成DNA的OG氧化水平的定性和定量檢測,該方法還有望拓展到其它修飾堿基,具有廣泛的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：8-羥基脫氧鳥嘌呤 DNA氧化損傷 納米孔單通道 ?-溶血毒素
【學(xué)位授予單位】：中國礦業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-7
• Abstract7-17
• 1 緒論17-32
• 1.18-羥基脫氧鳥嘌呤及其生物學(xué)意義17-18
• 1.2 8-羥基脫氧鳥嘌呤檢測方法概述18-20
• 1.3 納米孔單通道檢測技術(shù)20-29
• 1.4 納米孔單分子檢測技術(shù)應(yīng)用于OG檢測29-30
• 1.5 本論文主要研究內(nèi)容30-32
• 2 實(shí)驗(yàn)部分32-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與主要儀器設(shè)備32-34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容34-41
• 3 OG化學(xué)修飾方法優(yōu)化41-53
• 3.1 一端氨基和兩端氨基對OG反應(yīng)產(chǎn)率的影響43-49
• 3.2 PEG和烷基鏈對OG反應(yīng)產(chǎn)率的影響49
• 3.3 修飾側(cè)鏈長度對特征信號的影響49-51
• 3.4 本章小結(jié)51-53
• 4 雜化體DNA7-ADìCB[7]穿越納米孔時(shí)產(chǎn)生的特征電流信號研究53-59
• 4.1 主客體相互作用對特征信號的影響53-55
• 4.2 雜化體DNA7-AdìCB[7]特征電信號分析55-58
• 4.3 本章小結(jié)58-59
• 5 OG的定性和定量檢測59-66
• 5.1 OG的定性檢測59-62
• 5.2 OG的定量檢測62-64
• 5.3 本章小結(jié)64-66
• 6 有機(jī)化合物的表征66-71
• 7 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)71-73
• 7.1 結(jié)論71-72
• 7.2 創(chuàng)新點(diǎn)72-73
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 作者簡歷80-82
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集82

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張春萍;;a溶血素納米孔的研究進(jìn)展和應(yīng)用[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年05期

2 Siqi Zhang;Ting Sun;Erkang Wang;Jiahai Wang;;Investigation of self-assembled protein dimers through an artificial ion channel for DNA sensing[J];Chinese Science Bulletin;2014年35期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 應(yīng)佚倫;基于生物納米通道的單分子弱相互作用研究[D];華東理工大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊純;納米孔單通道記錄在金屬離子檢測中的應(yīng)用[D];長沙理工大學(xué);2013年

2 李云云;石英毛細(xì)管上納米孔粒子通過事件檢測方法初步研究[D];東北大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：8-羥基脫氧鳥嘌呤的選擇性化學(xué)修飾及其納米孔單分子檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321188