目的：探討低氧時淋巴細胞[Ca²⁺]i變化與淋巴細胞增殖活化的關系以及MφNF-κB信號轉導通路的激活和對前炎癥因子TNF-α和IL-6的調控作用。以了解低氧對免疫細胞功能的影響及機制，闡明低氧性炎癥反應的機理。方法：建立淋巴細胞和Mφ低氧培養(yǎng)模型；ELISA法檢測培養(yǎng)液中IL-2、TNF-α和IL-6的分泌水平；MTT法測定淋巴細胞轉化率；RT-PCR法觀察TNF-α、IL-6和p65轉錄水平；熒光分光光度法測定淋巴細胞[Ca²⁺]i變化和Mφ內ROS水平；Western blotting法檢測Mφ胞漿內IκBα的磷酸化水平和細胞核內NF-κB的激活量。結果：①急性低氧后淋巴細胞[Ca²⁺]i下降，同時IgG、IL-2分泌量和淋巴細胞增殖率也明顯下降；低氧預處理后再進行急性低氧，發(fā)現(xiàn)上述指標都恢復到與對照組相近的水平。②低氧后Mφ前炎癥因子TNF-α和IL-6分泌和轉錄水平增加，同時IκBα酪氨酸磷酸化水平、細胞核內NF-κB激活量以及NF-κB P65轉錄水平增高。③抗氧化劑NAC可使IκBα酪氨酸磷酸化水平下降，酪... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 低氧及低氧預處理后淋巴細胞[Ca~(2+)]i變化與淋巴細胞增殖活化的關系
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 淋巴細胞分離培養(yǎng)
        2 實驗分組
        3 Fura-2／AM熒光分光光度法檢測[Ca~(2+)]i
        4 ELISA法檢測IgG
        5 ELISA法檢測IL-2
        6 MTT法檢測淋巴細胞增殖率
        7 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結果
        1 細胞內Ca~(2+)濃度檢測結果
        2 IgG分泌量檢測結果
        3 IL-2分泌量檢測結果
        4 淋巴細胞增殖率檢測結果
    四、 討論
    小節(jié)
第二部分 低氧對Mφ前炎癥因子分泌的影響
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 非特異性酯酶染色法鑒定Mφ
        3 實驗分組
        4 ELISA法檢測TNF-α
        5 ELISA法檢測IL-6
        6 Mφ總RNA分離與提取
        7 RNA濃度分析和純度鑒定
        8 甲醛變性電泳鑒定RNA完整性
        9 RT-PCR檢測TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表達水平
        10 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結果
        1 Mφ培養(yǎng)
        2 Mφ鑒定結果
        3 不同氧濃度條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        4 不同低氧時間條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        5 RNA純度鑒定的結果
        6 RNA完整性鑒定的結果
        7 不同氧濃度條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達量
        8 不同低氧時間條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達量
    四、 討論
    小節(jié)
第三部分 低氧后Mφ前炎癥因子分泌增加的機制-NF-κB信號轉導通路的激活
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 實驗分組及檢測指標
        3 熒光分光光度法檢測細胞內ROS水平
        4 胞漿蛋白提取方法
        5 細胞核內蛋白提取方法
        6 考馬斯亮藍蛋白定量法
        7 Western blotting法檢測IκBα酪氨酸磷酸化水平
        8 Western blotting法檢測細胞核內NF-κB激活量
        9 RT-PCR法檢測NF-κBp56的轉錄水平
        10 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結果
        1 細胞內ROS水平檢測結果
        2 IκBα酪氨酸磷酸化水平檢測結果
        3 細胞核內NF-κB激活量
        4 抗氧化劑對低氧時IκBα磷酸化水平的影響
        5 酪氨酸蛋白激酶抑制劑對低氧時Mφ核內NF-κB激活量的影響
        6 NF-κBp65轉錄水平檢測結果
    四、 討論
    小節(jié)
結論
參考文獻
附錄
致謝
文獻綜述
碩士期間發(fā)表和待發(fā)表的文章及參加的學術會議


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]自主神經系統(tǒng)參與低氧下的免疫調節(jié)作用[J]. 白海波,杜繼曾,鄭筱祥.  中國應用生理學雜志. 2001(03)
[4]核因子κB（Nuclear Factor κB,NF-κB）:一個新的治療目標[J]. 冷啟新,hotmail.com,劉執(zhí)玉,李瑞祥.  解剖科學進展. 1999(04)
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[6]7000m急性低壓缺氧對T、B淋巴細胞增殖反應影響的實驗研究[J]. 高梅,王典瑞,徐斌,張曉秀,趙行宇.  航空軍醫(yī). 1998(03)
[7]促腎上腺皮質激素釋放因子介導低氧應激抑制淋巴細胞轉化的實驗研究[J]. 白海波,杜繼曾.  中國應用生理學雜志. 1995(03)



本文編號：3201983