為了初步明確lytR基因的保守性以及探討LytR蛋白在肺炎鏈球菌中的生物學功能。本研究利用PCR和測序方法分析lytR基因20種不同序列型肺炎鏈球菌臨床分離株的保守性;利用Western blotting技術分析lytR在細菌不同生長階段的表達情況;隨后,利用紅霉素片段替代lytR基因構建D39ΔlytR缺陷菌株,通過生長曲線分析、電鏡下形態(tài)觀察、以及磷壁酸含量測定揭示LytR蛋白在細菌生長、細菌形態(tài)以及磷壁酸合成中的作用。研究發(fā)現(xiàn)20種不同序列型肺炎鏈球菌臨床菌株的lytR基因序列一致性>99.3%;Western blotting結果顯示lytR在細菌不同生長階段穩(wěn)定表達;D39ΔlytR缺陷株生長明顯變緩,細菌表現(xiàn)為不成熟自溶;D39ΔlytR全菌磷壁酸含量顯著減少,而培養(yǎng)基上清中的磷壁酸含量顯著增多。本研究表明lytR基因非常保守,在肺炎鏈球菌不同生長階段均有表達,并可能通過連接酶的作用影響細菌生長和參與肺炎鏈球菌磷壁酸的合成,有望成為一種新的抗生素和藥物靶點。 

【文章來源】：基因組學與應用生物學. 2019,38(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 lytR基因保守性分析
    1.2 不同生長階段LytR蛋白表達情況分析
    1.3 lytR缺陷菌的構建及鑒定
    1.4 lytR基因缺失導致細菌生長受損
    1.5 lytR與細菌磷壁酸的合成有關
    1.6 lytR影響肺炎鏈球菌磷壁酸的胞外連接
2 討論
3 材料與方法
    3.1 菌株
    3.2 試劑和相關材料
    3.3 lytR基因保守性分析
    3.4 PCR擴增lytR基因上、下游側臂片段
    3.5 肺炎鏈球菌的實驗室轉化
    3.6 肺炎鏈球菌D39ΔlytA、D39ΔlytRΔlytA的構建以及D39ΔlytR compl (回補株) 的構建
    3.7 Western blotting分析
    3.8 生長曲線
    3.9 磷壁酸的ELSIA測定
    3.1 0 磷壁酸的Dot blot測定
    3.1 1 統(tǒng)計學分析
作者貢獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大腸桿菌感受態(tài)細胞制備及轉化條件優(yōu)化[J]. 代軍.  江蘇農業(yè)科學. 2015(04)
[2]肺炎鏈球菌假想轉錄因子LytR的表達、純化、晶體生長及優(yōu)化[J]. 閔迅,鐘文,趙沙沙,董杰,董珊珊,周愛娥,閆文娟,汪德強.  生物醫(yī)學工程學雜志. 2013(04)
[3]一種減毒肺炎鏈球菌溶血素突變體的構建與表達[J]. 吳凱峰,張薇薇,崔亞利,張雪梅,胥文春,龐丹,劉鑫,王虹.  醫(yī)學分子生物學雜志. 2010 (05)



本文編號：3197960