目的:原核表達人降鈣素原（procalcitonin,PCT）重組蛋白,制備高純度的PCT單克隆抗體。方法:將構(gòu)建的PCT-pET22b表達載體轉(zhuǎn)入大腸埃希菌BL21中誘導(dǎo)表達PCT蛋白,經(jīng)Ni-NTA親和層析法純化,用蛋白質(zhì)印跡法和膠體金法對其進行鑒定。獲得的PCT重組蛋白采用長程免疫法皮下多點注射Balb/c小鼠,取小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞（SP2/0）融合,篩選陽性雜交瘤細胞株并進行亞克隆4次。將細胞株注入小鼠腹腔收集腹腔積液獲得單克隆抗體,經(jīng)辛酸硫酸銨法和Protein G親和層析法進行純化。結(jié)果:SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示在相對分子質(zhì)量約14 k Da處有一明顯條帶,與目的蛋白大小相符。蛋白質(zhì)印跡法和膠體金法證明該可溶性蛋白為PCT。采用細胞融合技術(shù)成功篩選出7株陽性雜交瘤細胞,將其命名為B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2。選B3和C4細胞株通過體內(nèi)誘生法制備單克隆抗體,經(jīng)純化后純度可達95%以上。間接ELISA法檢測B3、C4抗體效價均可達10⁷,親和常數(shù)分別為5. 06×10⁸,7. 3×10⁸。結(jié)... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019,29(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動物和細胞株
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 PCT重組蛋白的表達、純化與鑒定
    1.4 雜交瘤細胞的制備
        1.4.1 動物免疫
        1.4.2 制備飼養(yǎng)細胞
        1.4.3 細胞融合
    1.5 小鼠體內(nèi)誘生法制備PCT單克隆抗體
    1.6 單克隆抗體的純化
        1.6.1 辛酸硫酸銨法粗提抗體
        1.6.2 Protein G親和層析法純化
    1.7 單克隆抗體純度、效價、親和力分析
        1.7.1 純度
        1.7.2 間接ELISA法測定單克隆抗體的效價
        1.7.3 間接ELISA法測定單克隆抗體的親和力
2 結(jié)果
    2.1 PCT重組蛋白的表達、純化與鑒定
    2.2 雜交瘤細胞的篩選及亞克隆
    2.3 單克隆抗體性質(zhì)的初步測定
        2.3.1 純度鑒定
        2.3.2 抗體效價測定
        2.3.3 抗體親和力測定
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3182083