發(fā)布時間：2021-04-21 05:27

　　目的:利用轉基因細胞法建立抗人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）單抗的抗體依賴細胞介導的細胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）生物學活性檢測方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT轉基因細胞系作為效應細胞,SKBR3細胞系作為靶細胞,通過熒光素酶檢測系統(tǒng)（BioGloTM Luciferase Assay system）進行抗HER2單抗的ADCC生物學活性檢測,同時對試驗條件進行優(yōu)化及方法學驗證,并將該檢測方法用于不同類型的抗HER2單抗ADCC效應的評價。結果:抗HER2單抗在該方法中存在量效關系,且符合四參數(shù)方程式:y=（A-D）/[1+（x/C）^B]+D,方法經優(yōu)化后確定靶細胞為SKBR3細胞,抗體稀釋起始工作質量濃度為4 000 ng·mL^-1,1∶4倍的稀釋倍數(shù),效靶比為15∶1,誘導時間為20 h。該方法具有良好的專屬性;3次獨立檢測的板間、日間最大誘導倍數(shù)（fo... 

【文章來源】：藥物分析雜志. 2019,39(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要儀器
    1.2 材料
    1.3 方法
        1.3.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT細胞株的構建
            1.3.1. 1 質粒轉染效應細胞株
            1.3.1. 2 效應細胞株的篩選
        1.3.2 ADCC生物學活性測定
        1.3.3 試驗條件的優(yōu)化
            1.3.3. 1 靶細胞的選擇
                1.3.3. 1. 1 流式細胞術檢測不同靶細胞表面HER2表達量
                1.3.3. 1. 2 不同HER2+靶細胞的免疫熒光檢測
                1.3.3. 1. 3 不同HER2+靶細胞的ADCC活性測定
            1.3.3. 2 抗體濃度范圍的選擇
            1.3.3. 3 效靶比的選擇
            1.3.3. 4 誘導時間的選擇
        1.3.4 方法學驗證
            1.3.4. 1 專屬性試驗
                1.3.4. 1. 1 靶細胞專屬性
                1.3.4. 1. 2 效應細胞專屬性
                1.3.4. 1. 3 抗體專屬性
            1.3.4. 2 精密性試驗
            1.3.4. 3 準確性試驗
        1.3.5 方法應用
            1.3.5. 1 檢測不同類型的抗HER2單抗的ADCC活性
            1.3.5. 2 檢測不同變性程度的抗HER2單抗的ADCC活性
                1.3.5. 2. 1 酶切變性試驗
                1.3.5. 2. 2 熱穩(wěn)定性試驗
2 結果
    2.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT細胞株的構建
    2.2 抗HER2單抗的ADCC劑量效應曲線
    2.3 ADCC試驗條件的優(yōu)化
        2.3.1 靶細胞的選擇
            2.3.1. 1 流式細胞術檢測不同靶細胞表面HER2表達量
            2.3.1. 2 不同HER2 （+） 靶細胞的免疫熒光檢測
            2.3.1. 3 不同HER2+靶細胞的ADCC測定
        2.3.2 抗體濃度范圍的選擇
        2.3.3 效靶比的選擇
        2.3.4 誘導時間的選擇
    2.4 方法學驗證
        2.4.1 專屬性
        2.4.2 精密性
        2.4.3 準確性
    2.5 方法應用
        2.5.1 對HER2靶點的不同類型單克隆抗體類藥物的ADCC活性比較
        2.5.2 對HER2靶點的不同變性程度的單克隆抗體藥物的ADCC活性比較
            2.5.2. 1 酶切變性
            2.5.2. 2 熱穩(wěn)定性試驗
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]針對HER2靶點的抗體藥物研究與腫瘤靶向治療[J]. 湯沁,丁倩,林莉,張珍珍,代爭,詹金彪.  藥學學報. 2012(10)
[2]乳腺癌HER2基因的研究進展及其靶點治療[J]. 喬杉杉,王大業(yè).  首都醫(yī)科大學學報. 2008(01)



本文編號：3151147