目的探討大腸埃希菌外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）作為新型DNA疫苗遞送載體的潛力及價(jià)值。方法從大腸埃希菌DH5α的培養(yǎng)上清中經(jīng)過(guò)濾、超濾、超速離心等步驟收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度離心法純化OMVs。將純化后的OMVs與哺乳動(dòng)物吞噬細(xì)胞及非吞噬細(xì)胞進(jìn)行體外孵育,觀察不同細(xì)胞對(duì)OMVs的攝取效率。通過(guò)電擊轉(zhuǎn)化方式將帶綠色熒光蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP轉(zhuǎn)入OMVs中,并與RAW264. 7細(xì)胞共孵育,觀察OMVs攜帶真核表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞并表達(dá)綠色熒光蛋白的情況。結(jié)果密度梯度離心法可有效純化OMVs,純化后的OMVs進(jìn)入不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞的效率不同,進(jìn)入吞噬細(xì)胞的效率高于非吞噬細(xì)胞,經(jīng)電擊轉(zhuǎn)化后,質(zhì)粒DNA可被導(dǎo)入OMVs中,并隨吞噬細(xì)胞攝取及表達(dá)。結(jié)論約5 300 bp的真核表達(dá)質(zhì)粒可用電擊方式導(dǎo)入OMVs中,并通過(guò)OMVs介導(dǎo)該質(zhì)粒在吞噬細(xì)胞中表達(dá),提示OMVs具有作為新型質(zhì)粒DNA遞送載體的潛力。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019,32(01)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、細(xì)胞及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3大腸埃希菌DH5α分泌OMVs的收集
    1.4 OMVs的純化
    1.5 OMVs的透射電鏡觀察
    1.6 哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)OMVs的攝取情況分析
    1.7 OMVs介導(dǎo)的外源質(zhì)粒在吞噬細(xì)胞中表達(dá)的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 大腸埃希菌DH5α分泌OMVs的鑒定
        2.1.1 透射電鏡觀察
        2.1.2 SDS-PAGE分析
    2.2 純化OMVs的鑒定
        2.2.1 SDS-PAGE分析
        2.2.2 透射電鏡觀察
    2.3 哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)OMVs的攝取情況
    2.4 OMVs介導(dǎo)的外源質(zhì)粒在吞噬細(xì)胞中的表達(dá)
3 討論



本文編號(hào)：3148946