戊型肝炎作為一種經糞-口途徑傳播的急性傳染病，主要流行于亞洲、非洲、中美洲等發(fā)展中國家和地區(qū)。其病毒基因組是單股線狀正鏈RNA，長約7.5kb，由5′非編碼區(qū)、編碼區(qū)和3′非編碼區(qū)組成，編碼區(qū)包括三個開放讀碼框架（ORFs）。其中結構基因ORF2位于基因組的3′端，長1980bp，編碼病毒的結構蛋白。本實驗采用戊型肝炎病毒（HEV）新疆流行株（CH1.1）ORF2區(qū)3′端cDNA片段492bp，插入到融合蛋白表達載體pGEX-4T-3，轉化至大腸桿菌TG-1進行表達，以獲得的GST-HEV融合蛋白作為抗原，應用于酶免疫檢測（EIA）中。一、HEV目的基因的擴增 采用RT-nPCR法，擴增HEV ORF2區(qū)的核苷酸序列，目標長度為492bp，稱為HEV ORF2 cDNA。二、目的基因與融合蛋白表達載體pGEX-4T-3重組體的構建 BamHI/EcoRI雙酶切PCR擴增產物和pGEX-4T-3質粒，T₄連接酶連接酶切產物，轉化至感受態(tài)細胞TG-1，堿裂解法提取質粒DNA。經酶切、PCR鑒定，1％瓊脂糖凝膠電泳，紫外檢測儀下均可見約500bp陽性條帶，從... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：41 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 論文正文
    戊型肝炎病毒結構區(qū)ORF2基因的克隆與表達
四、 綜述
    基因重組表達戊型肝炎病毒的研究進展
五、 譯文
    戊型肝炎的研究現狀
六、 致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]戊型肝炎病毒結構區(qū)基因在大腸桿菌中的表達及其在診斷中的應用[J]. 畢勝利,江永珍,趙洪蘭,李景元,魯健,曹經瑗,劉崇柏.  病毒學報. 1996(02)
[2]戊肝病毒活性肽的選擇、合成與應用[J]. 戚中田,潘衛(wèi),崔大敷,俞超,崔恒冉.  中國病毒學. 1995(04)
[3]戊型肝炎病毒中國XT-179株全基因組cDNA克隆及其核苷酸和氨基酸序列分析[J]. 馬學眾,曹學義,內田俟和,Thin Thin Aye,志方俊夫.  中國病毒學. 1993(04)
[4]我國戊型肝炎病毒結構區(qū)基因組的序列分析[J]. 莊輝,李凡,郭曉霞,馬學眾,艾婷婷,內田俊和,志方俊夫.  中華實驗和臨床病毒學雜志. 1993 (01)



本文編號：3126123