目的：克隆人類DNA損傷修復(fù)基因hR24L，構(gòu)建其正義和反義表達(dá)載體重組體，為該基因的結(jié)構(gòu)和功能研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；用外源性hR24L基因轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，得到穩(wěn)定遺傳的細(xì)胞系。觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖速度的變化，檢測細(xì)胞周期，了解外源性hR24L基因轉(zhuǎn)染對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞周期的影響，研究其作用機(jī)制；觀察正義和反義hR24L基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，了解修復(fù)基因與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，為腫瘤的基因診斷和基因治療（特別是反義核酸）的研究積累資料；研究電離輻射對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)源性hR24L表達(dá)的影響，了解其作用特點(diǎn)。 方法：首先用PCR方法擴(kuò)增hR24L的開放閱讀框（ORF），克隆入pGEM-T載體，經(jīng)酶切鑒定和測序無突變后，重組到逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體（pDor-neo）中，得到正義和反義重組體（pDor-hR24Ls和pDor-hR24La）。然后用重組質(zhì)粒和空載體分別轉(zhuǎn)染MCF7細(xì)胞，篩選出陽性克隆，得到穩(wěn)定遺傳的細(xì)胞系，并用Southern印跡雜交證實(shí)外源性hR24L已成功整合到細(xì)胞基一2-因組中。觀察細(xì)胞生長速度，與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比較。用Northern印跡雜交檢測靶細(xì)胞hR24LmRNA的表達(dá)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]hR24L基因轉(zhuǎn)染對(duì)MCF7細(xì)胞周期的影響[J]. 李平法,梁東良,楊錦南,張文,朱應(yīng)葆.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2002(04)
[2]hR24L基因轉(zhuǎn)染對(duì)MCF7細(xì)胞凋亡的影響[J]. 李平法,朱應(yīng)葆,韓云,童坦君,傅欣.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2001(04)
[3]電離輻射對(duì)人乳腺癌MCF7細(xì)胞系hR24L基因表達(dá)的影響[J]. 李平法,朱應(yīng)葆,韓云,賈廷珍,童坦君.  癌變.畸變.突變. 2001(02)
[4]人類DNA修復(fù)蛋白hR24Lp具有轉(zhuǎn)錄激活作用[J]. 李平法,傅欣,梁崇鳳,朱應(yīng)葆,童坦君.  北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(02)
[5]人類hR24L基因參與DNA切除修復(fù)和重組修復(fù)的研究[J]. 韓云,朱應(yīng)葆.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 1999(12)
[6]人DNA修復(fù)基因hR24L參與細(xì)胞周期檢定點(diǎn)調(diào)控[J]. 朱應(yīng)葆,韓云.  北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1999(03)
[7]紫外線照射對(duì)DNA修復(fù)基因RAD24轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 朱應(yīng)葆,韓云,傅欣,童坦君,賈廷珍.  北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1998(02)



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