目的 建立一種改進(jìn)的AdEasy系統(tǒng)應(yīng)用于復(fù)制缺陷型腺病毒的構(gòu)建，針對傳統(tǒng)的細(xì)菌內(nèi)同源重組法制備腺病毒過程仍較復(fù)雜，成功率低和對實(shí)驗(yàn)室條件要求高等缺點(diǎn)，通過先構(gòu)建AdEasier-1細(xì)菌后進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)同源重組來簡化實(shí)驗(yàn)過程，縮短實(shí)驗(yàn)周期，提高成功率，降低對實(shí)驗(yàn)室條件的要求，以利于在更多實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。并利用這一系統(tǒng)構(gòu)建KDR啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的同時(shí)含大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（CD）基因和Ⅰ型單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的融合基因重組腺病毒載體，應(yīng)用于大腸癌的抗血管生成治療。利用KDR啟動(dòng)子對腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶向作用，驅(qū)動(dòng)CD/5-FC和HSV-TK/GCV兩套自殺基因系統(tǒng)特異性殺傷腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞，為進(jìn)一步開展腫瘤血管的靶向治療研究奠定基礎(chǔ)。 方法 1、改進(jìn)的AdEasy系統(tǒng)的建立 應(yīng)用氯化鈣法將腺病毒骨架質(zhì)粒AdEasey-1轉(zhuǎn)化于BJ5183菌，所得陽性克隆即為AdEasier-1細(xì)菌，pAdtrack經(jīng)酶切線性化后，轉(zhuǎn)化用氯化鈣制備的感受態(tài)AdEasier-1細(xì)菌，獲得重組腺病毒質(zhì)粒。最后將線性化的重組腺病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293細(xì)胞包裝獲得重組腺病毒。通過... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

經(jīng)3次293細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增，并經(jīng)cscl梯度離心后，病毒滴度為Zxlo，’pfil八nl

Plas而dPeDNA3一CDTK誠thPrilnerCD(刊CD(一):Lane6:PCRProduetofPlas而dPcDNA3一CDTKwithPnmerTK(+盯K(一)圖2一重組質(zhì)粒pKDR-CDTK的PCR及酶切鑒定Fig.2一2IdentifiCationofn沈ombinantpKI〕R-CDTKbyPCR陰drestrictionenZymedigestionLalleKDR1:M扭火e(1加bPladder，TaK司Ra);LaneZ:PCRProduetsofgenescodiilgLalle3:pKDR一CDTKdegisted初thBglll干牙ndlll;L川e4:M擬火er田016一2，dingguo)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血管內(nèi)皮生長因子及其受體在人大腸癌組織中的分布、定量和意義[J]. 陳治,王曉莉,張莉,黃宗海,潘玉先,曹長安.  世界華人消化雜志. 2000(04)



本文編號(hào)：3115455