目的:通過觀察缺氧預(yù)處理對心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用及鋅指核轉(zhuǎn)錄因子ZFP580表達的改變,探討ZFP580的作用及機制。方法:培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞,分為3組:（1）缺氧/復(fù)氧（H/R）組:H9c2心肌細胞換用模擬缺血溶液（pH=6.2）缺氧（95%N2+5%CO2）培養(yǎng)3 h,復(fù)氧培養(yǎng)2 h;（2）缺氧預(yù)適應(yīng)（HPC）組:H9c2心肌細胞經(jīng)3個循環(huán)的短暫缺氧（10 min）/復(fù)氧（20 min）處理后,進行同上H/R實驗;（3）對照（C）組:正常培養(yǎng)的H9c2心肌細胞。通過MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。Western blotting方法觀察心肌細胞中轉(zhuǎn)錄因子ZFP580表達及ERK1/2磷酸化情況,以及ERK1/2磷酸化抑制劑PD98059對ZFP580表達的影響。分別構(gòu)建高/低表達ZFP580的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染H9c2心肌細胞,經(jīng)H/R實驗后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式細胞術(shù)檢測H9c2細胞凋亡情況,Western bloting方法觀察caspase-3活化情況。結(jié)果:HPC能顯著改善H/R處理后H9c2心肌細胞存活率降低和LDH漏出的... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2014,30(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

HPC對H/Ｒ處理后心肌細胞中ZFP580表達及EＲK1/2磷酸化的影響

ing方法驗證，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染能明顯改變H9c2心肌細胞中ZFP580的表達水平，見圖4A。轉(zhuǎn)染Lenti-ZFP580使ZFP580高表達的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后，心肌細胞中活化caspase-3表達下降，明顯低于轉(zhuǎn)染Lenti-NC的陰性對照組。轉(zhuǎn)染Lenti-siＲNA使ZFP580低表達或不表達的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后，心肌細胞中活化caspase-3表達上升，明顯高于ZFP580高表達組及陰性對照組，見圖4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．圖3PD98059對HPC處理后ZFP580表達的影響Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．圖4慢病毒介導(dǎo)的ZFP580基因轉(zhuǎn)染對H/Ｒ處理后caspase-3表達的影響5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式細胞術(shù)檢測結(jié)果轉(zhuǎn)染不同慢病毒載體的H9c2心肌細胞經(jīng)H/Ｒ處理后，流式細胞儀均可檢測到凋亡細胞。轉(zhuǎn)染Lenti-ZFP580后高表達ZFP580的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后細胞凋亡率明顯低于轉(zhuǎn)染Lenti-NC的陰性對照組，轉(zhuǎn)染Lenti-siＲNA后低表達或不表達ZFP580的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后細胞凋亡率升高，明顯高于ZFP580高表達組及陰性對照組，見圖5。討論缺氧預(yù)處理能增強機體對缺血、缺氧、缺血/再灌注等損傷的耐受性，然而其發(fā)揮保護作用的機制尚未完全闡明。有研究認為HPC的保護機制與其引起的大量內(nèi)源性保護物質(zhì)的釋放有關(guān)，如腺苷、氧自由基清除酶、緩激肽及多種保護蛋白均被證實參與了HPC的保護作用［8-9］。然而，從細胞感受細胞外的缺氧信號，并將信號傳至胞內(nèi)，最終引起內(nèi)源性保護物質(zhì)的釋放，其中必然存在復(fù)?

3PD98059對HPC處理后ZFP580表達的影響H9c2心肌細胞經(jīng)PD98059預(yù)處理1h后進行HPC及H/Ｒ實驗，Westernblotting結(jié)果顯示PD98059預(yù)處理明顯抑制HPC誘導(dǎo)的ZFP580的表達上調(diào)，而DMSO對照組細胞ZFP580在HPC及H/Ｒ后表達未受影響，見圖3。4慢病毒介導(dǎo)ZFP580基因轉(zhuǎn)染對H/Ｒ處理后caspase-3表達的影響經(jīng)Westernblotting方法驗證，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染能明顯改變H9c2心肌細胞中ZFP580的表達水平，見圖4A。轉(zhuǎn)染Lenti-ZFP580使ZFP580高表達的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后，心肌細胞中活化caspase-3表達下降，明顯低于轉(zhuǎn)染Lenti-NC的陰性對照組。轉(zhuǎn)染Lenti-siＲNA使ZFP580低表達或不表達的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后，心肌細胞中活化caspase-3表達上升，明顯高于ZFP580高表達組及陰性對照組，見圖4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．圖3PD98059對HPC處理后ZFP580表達的影響Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．圖4慢病毒介導(dǎo)的ZFP580基因轉(zhuǎn)染對H/Ｒ處理后caspase-3表達的影響5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式細胞術(shù)檢測結(jié)果轉(zhuǎn)染不同慢病毒載體的H9c2心肌細胞經(jīng)H/Ｒ處理后，流式細胞儀均可檢測到凋亡細胞。轉(zhuǎn)染Lenti-ZFP580后高表達ZFP580的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后細胞凋亡率明顯低于轉(zhuǎn)染Lenti-NC的陰性對照組，轉(zhuǎn)染Lenti-siＲNA后低表達或不表達ZFP580的H9c2心肌細胞在H/Ｒ損傷后細胞凋亡率升高，明顯高于ZFP580高表達組及陰性對照組，見圖5。討論缺氧預(yù)處理能增強機體對缺血、缺氧、缺血/再灌注等損傷的耐受

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢病毒介導(dǎo)LOX-1基因RNA干擾抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細胞凋亡[J]. 劉彬,黃佳城,周迎春,孫學(xué)剛,曾文璧,李杏,臧書文,郝文文.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2012(02)
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本文編號：3110655