垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase activating polypeptide，PACAP）是具有重要生物學功能和極具應用價值的神經(jīng)多肽。為利用基因工程技術(shù)獲得非融合的重組人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（recombinant human PACAP，rhPACAP），采用rhPACAP與纖維素結(jié)合域（cellulose binding domain，CBD）融合表達，并在兩者之間引入Xa因子的識別位點（Ile-Glu-Gly-Arg↓）。融合蛋白CBD-PACAP經(jīng)纖維素親和層析純化后，Xa因子酶切釋放非融合重組PACAP。HPLC進一步純化的重組PACAP多肽經(jīng)Western blot與激光飛行質(zhì)譜鑒定。制備的rhPACAP具有促進胰腺癌細胞株SW1990胞內(nèi)cAMP合成的活性，表明其具有生物學活性。在兩個融合蛋白（CBD-PACAP和CBD-IGF）中Xa因子識別位點（Ile-Glu-Gly-Arg↓）前引入7個氨基酸組成的富含甘氨酸柔性短肽（Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly），經(jīng)比較Xa因子對引入短肽前、后融合蛋白的... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的酶切分析

圖4CBD一獄C^P(A)和CB卜玖C^P(B)融合蛋白的表達、純化和W七sternbolt鑒定Fig.4ExPressio氏PurincationandWesternboltofCB壓PACAP(A)andCB卜PACAP(B)fusionProteinsa:ExPressionandPurineationofCBD一PACAP(A):1.Unindueedbacteria;2.SuPernantofultrasonieatedbacteria;3.DePositofultrasonieatedbaeteria;4.Indueedbacteria;5·PurifiedProtein;M.Proteinmarker;b:W七sternboltofCB卜PACAP(A):1.Unindueedbaeteria;2.Indueedbaeteria;e:ExPressionandPurineationofCBD-PACAP(B):1·Unindueedbaeteria;M.Proteinmarke暇2.Indueedbaeteria;3.SuPernaotofultrasonicat.dbacteria;4·PurinedProtein;d:Westernb0ltofCBD-PACAP(B):1.Uninducedbacteria;2·IndUCedbaCteria采用相同的方法表達和純化CBD一IoF(A)和CBD一IGF(B)蛋白(圖5)。kD97.4一66)一

2al-琳圖4CBD一獄C^P(A)和CB卜玖C^P(B)融合蛋白的表達、純化和W七sternbolt鑒定Fig.4ExPressio氏PurincationandWesternboltofCB壓PACAP(A)andCB卜PACAP(B)fusionProteinsa:ExPressionandPurineationofCBD一PACAP(A):1.Unindueedbacteria;2.SuPernantofultrasonieatedbacteria;3.DePositofultrasonieatedbaeteria;4.Indueedbacteria;5·PurifiedProtein;M.Proteinmarker;b:W七sternboltofCB卜PACAP(A):1.Unindueedbaeteria;2.Indueedbaeteria;e:ExPressionandPurineationofCBD-PACAP(B):1·Unindueedbaeteria;M.Proteinmarke暇2.Indueedbaeteria;3.SuPernaotofultrasonicat.dbacteria;4·PurinedProtein;d:Westernb0ltofCBD-PACAP(B):1.Uninducedbacteria;2·IndUCedbaCteria采用相同的方法表達和純化CBD一IoF(A)和CBD一IGF(B)蛋白(圖5)。kD

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3097940