納米抗體具有相對分子質(zhì)量小、穩(wěn)定性高、特異性強(qiáng)以及能夠穿過血腦屏障等眾多優(yōu)勢,而且其能夠通過大腸桿菌、酵母等簡單微生物大量表達(dá)。大腸桿菌周質(zhì)表達(dá)納米抗體是目前納米抗體制備主要的方法之一,但是納米抗體的表達(dá)水平還相對較低。以pET22b和pMES4為載體構(gòu)建了兩種重組表達(dá)質(zhì)粒,并且比較了他們在不同宿主菌中表達(dá)納米抗體的情況。結(jié)果表明,以pMES4為載體的大腸桿菌能夠在周質(zhì)中可溶性表達(dá)納米抗體,而以pET22b為載體的大腸桿菌表達(dá)的納米抗體無法分泌到周質(zhì)空間中。隨后,通過IPTG濃度優(yōu)化及5 L發(fā)酵罐過程,控制實(shí)現(xiàn)了納米抗體在大腸桿菌周質(zhì)中的表達(dá)量達(dá)到308. 32 mg/L。研究提供了一種高效表達(dá)納米抗體的方法,為納米抗體的規(guī)模化制備奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：科學(xué)技術(shù)與工程. 2019,19(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 主要儀器
2 方法
    2.1 p ET22b-2D5和p MES4-2D5表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 轉(zhuǎn)化及陽性克隆子篩選
    2.3 搖瓶表達(dá)實(shí)驗(yàn)
    2.4 發(fā)酵罐表達(dá)實(shí)驗(yàn)
    2.5 ELISA分析
    2.6 Western印跡表達(dá)分析
    2.7 周質(zhì)蛋白分離純化和BCA定量方法
    2.8 納米抗體親和力的動力學(xué)分析
3 結(jié)果與討論
    3.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.2 p ET22b-2D5和p MES4-2D5在不同宿主菌中
    3.3 IPTG濃度對不同宿主菌表達(dá)納米抗體的影響
    3.4 發(fā)酵罐表達(dá)
    3.5 納米抗體分離純化
    3.6 納米抗體2D5親和力分析
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]癌胚抗原對直結(jié)腸偶發(fā)高代謝灶良惡性判斷[J]. 王志忠,張婷,王欽媛,周曉紅,劉曉飛,蘇家貴,歐陽曉輝,何寶明.  科學(xué)技術(shù)與工程. 2016(22)
[2]治療性單克隆抗體研究進(jìn)展[J]. 孫思凡,張部昌,靳彥文.  生物技術(shù)通訊. 2009(02)
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[4]基因工程抗體研究進(jìn)展[J]. 王秀紅,周素芳.  生物技術(shù)通訊. 2007(02)



本文編號：3057461