背景 根據(jù)流行病學資料，乙肝病毒攜帶者目前在世界約有2.2億，在我國為1.2億左右，約占全國人口的10％。HBV具有嚴格的嗜肝特異性，但是科學家們在肝外組織和細胞如胰臟、腎臟、皮膚、心臟、骨髓、淋巴細胞甚至男性生殖細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)HBV以游離和／或整合的方式存在。機體細胞內(nèi)HBV的存在可導致持續(xù)感染；HBV DNA整合可誘發(fā)多種染色體畸變；若突變激活癌基因，有可能誘發(fā)癌變。由于該病危害性大，流行面廣，因此其傳播途徑、發(fā)病機理及診療手段的研究一直是各國政府和科學家們高度重視的課題。 目的與意義 由于T淋巴細胞在機體清除HBV急慢性感染中發(fā)揮重要作用，而HBV DNA整合到精、卵細胞染色體上，有可能在親嬰間進行垂直傳播，因此進一步研究患者淋巴細胞與精、卵細胞內(nèi)HBV DNA的存在與整合，無論是對乙肝病毒的基礎(chǔ)理論研究還是臨床防治實踐都具有重要意義。 材料與方法 材料：①慢性乙肝患者外周血淋巴細胞與精子樣本；②小鼠卵母細胞；③pBR322-HBV DNA質(zhì)粒。方法：①用PCR與電泳技術(shù)檢測淋巴細胞和精子樣本中是否存在HBV DNA；②進行外周血培養(yǎng)制備淋巴細胞染色體，用熒光原位雜交技術(shù)... 

【文章來源】：汕頭大學廣東省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 乙肝病毒DNA在人淋巴細胞與精子中的存在與整合
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 HBV DNA的轉(zhuǎn)化、提取、鑒定和定量
            2.2.2 HBV DNA在人淋巴細胞與精子DNA中的存在
                2.2.2.1 淋巴細胞和精子DNA的提取
                2.2.2.2 淋巴細胞和精子DNA的PCR實驗
            2.2.3 HBV DNA在人淋巴細胞染色體上的整合
                2.2.3.1 外周血培養(yǎng)及淋巴細胞染色體的制備
                2.2.3.2 熒光原位雜交探針的制備
                2.2.3.3 熒光原位雜交探針純化和測定
                2.2.3.4 淋巴細胞染色體與HBV DNA探針FISH實驗
    3 結(jié)果
        3.1 HBV DNA的鑒定和定量結(jié)果
        3.2 乙肝患者淋巴細胞和精子DNA的PCR結(jié)果
        3.3 熒光原位雜交探針的定量結(jié)果
        3.4 淋巴細胞染色體與HBV DNA探針FISH結(jié)果
    4 討論
        4.1 HBV DNA在淋巴細胞中的存在與整合
        4.2 HBV DNA在人精子DNA中的存在
        4.3 淋巴細胞與精子樣本HBV DNA檢測結(jié)果比較分析
        4.4 創(chuàng)新與不足
        4.5 展望
第二部分 乙肝病毒DNA在小鼠卵母細胞中的存在與整合
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 卵母細胞超排
            2.2.2 卵母細胞與HBV DNA共培養(yǎng)
            2.2.3 HBV DNA在卵母細胞DNA中的存在
                2.2.3.1 卵母細胞中HBV DNA的提取
                2.2.3.2 斑點和Southern雜交探針的制備
                2.2.3.3 洗液樣本的斑點雜交實驗
                2.2.3.4 卵母細胞DNA的PCR實驗
                2.2.3.5 PCR產(chǎn)物Southern雜交實驗
            2.2.4 HBV DNA在卵母細胞染色體上的整合
                2.2.4.1 卵母細胞染色體的制備
                2.2.4.2 卵母細胞染色體與HBV DNA探針FISH實驗
    3 結(jié)果
        3.1 洗液斑點雜交結(jié)果
        3.2 卵母細胞DNA的PCR實驗結(jié)果
        3.3 卵母細胞DNA擴增產(chǎn)物Southern結(jié)果
        3.4 卵母細胞染色體與HBV DNA探針FISH結(jié)果
    4 討論
        4.1 HBV DNA在卵母細胞DNA中的存在
        4.2 HBV DNA在卵母細胞染色體上的整合
        4.3 創(chuàng)新與不足
        4.4 展望
            4.4.1 肝病毒基因母嬰垂直傳播新途經(jīng)的研究
            4.4.2 以卵母細胞作載體進行轉(zhuǎn)基因研究
    5 全文小結(jié)
    6 參考文獻
附錄1: 主要縮略語
附錄2: 主要混合液及培養(yǎng)基
綜述
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒的父兒傳播與肝外定位[J]. 王珊珊,姜普林,彭桂福,曾年華,王志斌.  中華肝臟病雜志. 1999(04)
[2]乙型肝炎病毒對精子染色體的影響[J]. 黃建民,黃天華,邱煥英,邱杰文,方小武,陳曉紅,莊天罡,蔡樹深,王永華,劉鴻禧,楊風霞,劉衛(wèi)東.  癌變.畸變.突變. 1999(02)
[3]乙型肝炎病毒感染經(jīng)精子傳播的可能性研究[J]. 趙連三,劉曉松,張智翔,王錦蓉,劉麗,雷秉鈞.  中華傳染病雜志. 1998(03)
[4]HBV感染的單核細胞分泌TNFα和PGE2的改變及其意義探討[J]. 光麗霞,顧長海.  中華傳染病雜志. 1995(04)
[5]乙型肝炎病毒父嬰傳播途徑的初步研究[J]. 張麗云,方之勛,鄭兆,劉新鈺,龔希平,吳玉祥.  中華傳染病雜志. 1994(04)
[6]乙型肝炎病毒與肝細胞癌變[J]. 琦祖和.  基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床. 1993(04)



本文編號：3046258