目的：構(gòu)建人巨細(xì)胞病毒（HCMV）AD169株及地方株基因組cDNA表達(dá)文庫(kù)，為進(jìn)一步研究其基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及功能創(chuàng)立基本條件。方法：從MOI=10人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染HF細(xì)胞96小時(shí)，提取mRNA OD260/OD280比值為2.1，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA片段，重組入λgtll EcoR酶切位點(diǎn)之間，包裝蛋白包裝，轉(zhuǎn)染宿主菌LE392和Y1090；經(jīng)IPTG誘導(dǎo)和x-gal顏色選擇測(cè)定。采用鼠多克隆抗血清進(jìn)行免疫學(xué)篩選和地高辛標(biāo)記特異性寡核苷酸探針進(jìn)行原位噬斑雜交篩選陽(yáng)性克隆，經(jīng)PCR擴(kuò)增鑒定。結(jié)果：構(gòu)建的cDNA表達(dá)文庫(kù)的庫(kù)容量分別為3.6×10⁶pfu/ml和3.3×10⁶pfu/ml，經(jīng)檢測(cè)HCMV AD169 cDNA文庫(kù)的重組效率為76%；免疫學(xué)篩選出陽(yáng)性克隆為168；pp65核酸探針進(jìn)行噬斑雜交篩選出34個(gè)陽(yáng)性克��；HCMV pp65全長(zhǎng)PCR擴(kuò)增出3個(gè)陽(yáng)性克隆。結(jié)論：通過(guò)抗血清和核酸雜交篩選證實(shí)成功的構(gòu)建了HCMV AD169株感染96小時(shí)cDNA表達(dá)文庫(kù)，并從AD169文庫(kù)中篩選出3個(gè)pp65陽(yáng)性克隆。本研究結(jié)果將為闡明... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
引言
材料方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人巨細(xì)胞病毒先天性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染小鼠模型的建立[J]. 王明麗,唐久來(lái),胡聞,史百芬,胡勇,畢克菊,李京培.  動(dòng)物學(xué)報(bào). 2000(02)
[2]孕婦巨細(xì)胞病毒感染與嬰兒先天性感染和先天性缺損的關(guān)系[J]. 傅建林,宋干,王汝琪,戴云.  中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào). 1983(03)



本文編號(hào)：3021751