目的 構(gòu)建蛇毒鋸鱗蝰素（Echistatin）的原核高效表達(dá)體系 方法 由Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蛇毒鋸鱗蝰素（Echistatin）的氨基酸序列，結(jié)合大腸桿菌蛋白質(zhì)合成體系對(duì)氨基酸密碼子使用的偏愛性，設(shè)計(jì)了Echistatin編碼基因，體外人工合成編碼基因DNA片段，通過適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶位點(diǎn)插入表達(dá)載體pBV220，分別構(gòu)建了Echistatin的單拷貝表達(dá)克隆、雙拷貝串聯(lián)表達(dá)克隆；進(jìn)一步通過PCR技術(shù)構(gòu)建Echistatin的融合表達(dá)基因克隆。由限制性內(nèi)切酶酶切實(shí)驗(yàn)、DNA序列測(cè)定鑒定重組表達(dá)質(zhì)粒的正確性。 將上述重組表達(dá)質(zhì)粒CaCl₂法轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109、DH5α、BL21（DE3）、BL21（DE3）plySs感受態(tài)細(xì)胞，溫控誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。SDS-PAGE及凝膠電泳分析系統(tǒng)檢測(cè)目的蛋白的分子量、表達(dá)亙，Western—blotting檢測(cè)目的蛋白的抗原抗體反應(yīng)特異性。 采用超聲結(jié)合溶菌酶的方法裂解大腸桿菌，檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)形式，純化融合蛋白，血小板聚集實(shí)驗(yàn)測(cè)定其生物學(xué)活性。 結(jié)果 設(shè)計(jì)并合成了Echi... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCR法鑒定重組質(zhì)粒結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3016413