管曉虹等（1991）建立了一株日本血吸蟲單克隆抗獨特型抗體（anti-id），命名為NP30，經(jīng)鑒定系腸相關(guān)抗原（GAA）的內(nèi)影像anti-id，與可溶性蟲卵抗原（SEA）及膜相關(guān)抗原（MAA）有部分交叉反應。NP30既可替代日本血吸蟲蟲源性抗原用于血清學診斷，又具有較好的抗感染免疫和抗病免疫作用。為分離、純化NP30模擬的抗原分子，應用NP30免疫BALB／c小鼠，建立了1株抗NP30的抗抗獨特型抗體（anti-anti-id），定名為NP48。NP48的Ig同型為IgG2b，與可溶性成蟲抗原（SWAP）和SEA的ELISA反應均為陽性。為了拓展NP48—這株本課題組有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗體的應用范圍，如將來構(gòu)建用于診治血吸蟲病的雙功能抗體，本課題在參照國內(nèi)外相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計并完成了以下研究內(nèi)容： 1．設(shè)計通用引物，擴增單克隆抗體NP48的可變區(qū)基因，經(jīng)亞克隆、測序鑒定其序列，與多個數(shù)據(jù)庫比對，進行序列分析，排除假基因。 2．設(shè)計引物，擴增NP48雙鏈抗體基因，經(jīng)亞克隆、測序鑒定其序列。構(gòu)建NP48雙鏈抗體基因的原核分泌型表達系統(tǒng)，分離可溶性表達產(chǎn)物與包涵體，鑒定其中目... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

vL、vH基因擴增產(chǎn)物1.0%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

電泳雙鏈抗體基因(DR/Dp)的Plll酶切位點)，約36lbP:lll酶切位點)，約349bp;HI，EeoRI酶切位點)，約385bp;約731bP:約719bp·克隆重組與測序結(jié)果測序(圖2)，證明構(gòu)建的雙鏈杭40

圖4.1%瓊脂糖凝膠電泳pBAD/g川和pM018-T-DR烏雙酶切及回收純化l:PBAD/g川2:DL15，000DNAMarker3:OL20()0DNAMarker4:PMD18一T-DR/(EeoRI+Hind111)5:PMD18一T-D武EcoRI+Hind111)圖5.1%瓊脂糖凝膠電pBAD/glll一DROp雙酶切鑒定l:DL巧，000DNAMarker2:DL2000ONAMarker3:PBAD龜111一DR/(EeoRI+Hind14:PBAD德111一D夕(EcoRI+Hind13.2重組蛋白的誘導表達和初步鑒定①pBAD/g111一DR、pBAD/9111一Dp的表達用左旋阿拉伯糖誘導目的蛋白的表達，以空載質(zhì)粒表達菌為對照，DR與D。在分子量約27KD的位置均有明顯的表達條帶，表達量約為

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2950356