人博卡病毒1型（Human bocavirus 1,HBoV1）非結(jié)構(gòu)蛋白NS1是多功能蛋白,對(duì)病毒復(fù)制有重要作用,同時(shí)可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡。在研究NS1蛋白功能時(shí),降低NS1蛋白對(duì)宿主細(xì)胞的毒性作用是急需解決的問(wèn)題�；诖�,文中建立了可調(diào)控表達(dá)HBoV1非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的穩(wěn)定細(xì)胞系。構(gòu)建NS1重組慢病毒質(zhì)粒（含可調(diào)控啟動(dòng)子）,應(yīng)用轉(zhuǎn)染試劑將NS1重組慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞。通過(guò)嘌呤霉素篩選抗性細(xì)胞、多西環(huán)素誘導(dǎo)NS1表達(dá),建立可穩(wěn)定表達(dá)NS1-100、NS1-70蛋白的HEK 293T細(xì)胞系,利用熒光標(biāo)記蛋白和Western blotting檢測(cè),確定NS1蛋白的表達(dá)。并在穩(wěn)定表達(dá)NS1細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染HBoV1啟動(dòng)子-熒光素酶基因的質(zhì)粒,分析NS1的反式轉(zhuǎn)錄激活活性。結(jié)果表明NS1蛋白可在建立的細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá),且穩(wěn)定表達(dá)NS1蛋白對(duì)HBoV1啟動(dòng)子有較強(qiáng)的激活活性,為進(jìn)一步研究非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的功能及人博卡病毒致病機(jī)理奠定了良好的基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物工程學(xué)報(bào). 2019年06期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞及主要試劑
    1.2 重組慢病毒質(zhì)粒pLVX-NS1-100和pLVX-NS1-70的構(gòu)建
    1.3 CCK-8測(cè)定細(xì)胞活性
    1.4 重組慢病毒的包裝
    1.5 病毒滴度的測(cè)定
    1.6 嘌呤霉素 （Puro） 工作濃度的確定
    1.7 穩(wěn)定表達(dá)NS1-100和NS1-70細(xì)胞系的篩選
    1.8 NS1-100和NS1-70的反式轉(zhuǎn)錄激活活性檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組質(zhì)粒pLVX-NS1-70和pLVX-NS1-100的構(gòu)建及鑒定
    2.2 藥物對(duì)HEK 293T細(xì)胞活性影響
    2.3 DOX誘導(dǎo)NS1蛋白表達(dá)對(duì)細(xì)胞活性的影響
    2.4 穩(wěn)定表達(dá)NS1-70或NS1-100細(xì)胞系的建立和鑒定
    2.5 NS1蛋白反式轉(zhuǎn)錄激活活性檢測(cè)
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