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重組人GST-PD-1融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其生物學(xué)特性的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-12-19 00:50
  B7-CD28超家族是最具特征的共刺激分子家族,不僅提供重要的正性共刺激信號(hào)(B7-1/B7-2-CD28,ICOSL-ICOS)起始和維持T細(xì)胞針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答,而且也提供負(fù)性共刺激信號(hào)(B7-1/B7-2-CTLA-4,PD-L1/PD-L2-PD-1)下調(diào)和終止T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。PD-1分子屬于CD28家族,是55KDa的Ⅰ型跨膜糖蛋白,胞外區(qū)包含一個(gè)IgV樣結(jié)構(gòu)域。此結(jié)構(gòu)域及胞外段的糖基化被認(rèn)為在與配體的結(jié)合中發(fā)揮重要的作用。一系列的研究表明,PD-1通過(guò)與其兩個(gè)配體PD-L1和PD-L2的作用而抑制T、B細(xì)胞的活化及細(xì)胞因子的產(chǎn)生,在維持機(jī)體的外周耐受發(fā)揮至關(guān)重要的作用。PD-1也參與了一系列疾病的發(fā)病。對(duì)小鼠的腫瘤和移植排斥模型的體外和體內(nèi)的研究表明,PD-1可作為腫瘤、自身免疫性疾病和移植排斥中有效的治療靶點(diǎn)。但是迄今為止,尚無(wú)商品化高純度的PD-1重組蛋白,限制了它的實(shí)驗(yàn)研究和臨床實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)克隆了PD-1的全長(zhǎng)和胞外段基因,并且首次在大腸桿菌中大規(guī)模的表達(dá),繼而進(jìn)一步純化了GST-PD-1融合蛋白,并建立了一個(gè)鑒定其生物學(xué)活性的方法,為以后的PD-1及相關(guān)分子實(shí)... 

【文章來(lái)源】:蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】:59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

重組人GST-PD-1融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其生物學(xué)特性的研究


PD一L一PD--l途徑對(duì)體內(nèi)T、B細(xì)胞激活的負(fù)調(diào)控模式

示意圖,表達(dá)質(zhì)粒,示意圖


PD一1胞外段cnNA的Rl’-pcR結(jié)果

酶切圖,重組表達(dá)質(zhì)粒,DNA序列分析,質(zhì)粒


重組表達(dá)質(zhì)粒(pGEx一sx一3一PD一1)PcR和酶切結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】:
碩士論文
[1]仿刺參銅鋅超氧化物歧化酶(Aj-SOD1)的功能及性質(zhì)分析[D]. 車(chē)明月.大連工業(yè)大學(xué) 2017
[2]TAT-MT融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達(dá)、純化及體外活性初步測(cè)定[D]. 劉皓熙.暨南大學(xué) 2011



本文編號(hào):2924929

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