目的探討足細胞自噬在膜性腎病經(jīng)典動物模型中的作用及其激活可能的細胞內(nèi)機制。方法將50只SPF級健康雄性SD大鼠隨機平均分為被動腎炎(PHN)2d組、PHN4d組、PHN7d組、PHN21d組以及對照組,建立大鼠PHN模型。觀察足細胞形態(tài)的變化和自噬泡,并計算單個腎小球足細胞的數(shù)量。采用免疫組織化學染色法對腎小球內(nèi)膜攻擊復合物C5b-9的沉淀和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表達進行檢測,用TUNEL法對腎小球內(nèi)細胞凋亡進行檢測,Western印跡法對腎小球自噬相關(guān)蛋白LC3、GRP78、p-PERK、p-JNK、ATF6α的表達進行檢測。結(jié)果至注射抗體后第21天可見典型模性腎病改變,而其尿蛋白量自建模3 d起有顯著上升,至21 d可達到(51.4±5.9)mg/24 h。P62蛋白并無在PHN模型大鼠腎小球內(nèi)發(fā)生堆積,故可確定LC3Ⅱ表達的提高非自噬流受阻導致。可觀察到造模早期ATF6α、p-PERK、p-JNK有逐步上升的趨勢,但21 d(即后期)又開始回落。結(jié)論膜性腎病免疫介導的損傷可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激從而增強足細胞自噬作用以保持其內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及生存。
【部分圖文】：

相對少于７ｄ的表達水平，如圖４ａ所示。Ｐ６２蛋白并無在ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)發(fā)生堆積，如圖４ｂ所示，故可確定ＬＣ３Ⅱ表達的提高非自噬流受阻導致。并且透射電鏡下可觀察到造模后７ｄ和２１ｄＰＨＮ模型大鼠足細胞內(nèi)自噬浸泡數(shù)量相較于對照組出現(xiàn)明顯上升，如圖４所示。注：ａ為腎小球足細胞ＷＴ１抗原染色（ＤＡＢ染色×４００）；ｂ為腎小球足細胞計數(shù)，表示為均數(shù)±標準差；ｎ＝８，相較于０ｄ組，Ｐ＜０．０５圖２ＰＨＮ模型大鼠腎小球足細胞特異性標記及計數(shù)注：ａ為ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)活化ｃａｓｐａｓｅ－３的表達，細胞核呈棕黃色，示腎小球內(nèi)細胞凋亡；ｂ為ＴＵＮＥＬ檢測圖３ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)細胞凋亡（ＤＡＢ染色×４００）中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志２０１９年６月第２２卷第３期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ２０１９，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３·３９２·

Ｎ模型大鼠腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白的表達相較于對照組，研究對象的腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激標志物ＧＲＰ７８從造模２ｄ起呈逐漸上升趨勢，７ｄ時明顯比對照組高，但２１ｄ時卻回落至正常水平；并且在檢測非折疊蛋白反應（ｕｎｆｏｌｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｒｅ－ｓｐｏｎｓｅ，ＵＰＲ）傳感器以及其下游信號分子時，可觀察到造模早期ＡＴＦ６α、ｐ－ＰＥＲＫ、ｐ－ＪＮＫ有逐步上升的趨勢，但２１ｄ（即后期）又開始回落，如圖５所示。圖５Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡法檢測ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及其下游信號通路相關(guān)蛋白的表達３討論腎小球基底膜足細胞下出現(xiàn)大量免疫復合物沉積且基底膜見彌漫性增厚是ＭＮ的主要特征，足細胞病變是其最突出的表現(xiàn)，故ＭＮ也可視為“足細胞病”的一種［９］。有研究［１０］顯示，在ＭＮ患者中均可觀察到程度不一的足細胞病變，包括足細胞泡變性、腫脹、崩解，足突融合、微融毛化等。由于足細胞類似于神經(jīng)元，其體內(nèi)分裂繁殖能力不強，故發(fā)生受損時將難以再生恢復［１１］。很多文獻［１２］顯示，腎小球硬化很大程度上是足細胞受損乃至缺失所促使的。本研究發(fā)現(xiàn)，ＰＨＮ模型大鼠在４ｄ起可明顯觀察到足突融合現(xiàn)象，隨時間延長，足細胞病變逐步加劇，至２１ｄ可觀察到一系列病變，包括胞體腫脹、足突融合以及微絨毛化等，且該時間段可見研究對象組單位腎小球足細胞絕對數(shù)目顯著低于對照組。可以判斷，足細胞在ＰＨＮ病變過程中確實會發(fā)生損傷乃至
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 任晶晶;張偉;何強;;自噬與特發(fā)性膜性腎病研究進展[J];浙江臨床醫(yī)學;2018年09期

2 楊鳳杰;周建華;呂倩影;蒲金赟;張瑜;;足細胞自噬在被動Heymann腎炎發(fā)病中的作用[J];中華腎臟病雜志;2014年01期

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 宋詡;盧宏柱;;自噬在腎臟疾病中的作用[J];中華實用兒科臨床雜志;2017年05期

2 金娟;林波;龔建光;趙黎;李一文;何強;;特發(fā)性膜性腎病足細胞自噬活性改變及其臨床意義[J];中華腎臟病雜志;2016年08期

3 蔣羅;于力;于生友;溫捷;張瑤;郝志宏;;自噬與阿霉素腎病大鼠腎組織損傷的關(guān)系[J];中華腎臟病雜志;2015年05期

4 于力;王輝陽;;Beclin-1在腎小球足細胞自噬調(diào)控中的作用[J];中華實用兒科臨床雜志;2014年17期

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張瑜;周建華;王洪濤;;乙型肝炎病毒相關(guān)性膜性腎病患兒足細胞缺失的研究[J];中華兒科雜志;2007年05期

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鮑麗;么冬愛;;足細胞自噬在膜性腎病經(jīng)典動物模型中的作用及其激活可能的細胞內(nèi)機制研究[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志;2019年03期

2 劉剛,王海燕;成人特發(fā)性膜性腎病腎病綜合征的治療進展[J];中華腎臟病雜志;1996年04期

3 劉旺意;鄧躍毅;蔡小凡;向玲;魯珍珍;陳萬佳;;特發(fā)性膜性腎病動物模型的研究進展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2019年05期

4 馬繼偉;丁元;范冬雨;秦明哲;張翥;;特發(fā)性膜性腎病動物模型及中藥干預[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2016年07期

5 劉愛玲;呂紅;錢家鳴;;細胞自噬和衰老及衰老相關(guān)疾病[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2019年04期

6 奇云;;細胞自噬機制研究緣何摘得諾獎?——2016年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎解讀[J];生命世界;2016年12期

7 王海杰;譚玉珍;;細胞自噬機制開啟疾病治療新途徑[J];解剖學報;2017年01期

8 林承列;李江;周宜;孫艷紅;王麗華;胡鈞;樊春海;;基于細胞自噬機制的健康科學研究進展[J];核技術(shù);2017年02期

9 賈靜文;;細胞自噬的研究進展[J];山西農(nóng)經(jīng);2017年03期

10 焦寒偉;王紅均;趙宇;伍莉;帥學宏;陳吉軒;甘玲;羅獻梅;黃慶洲;;細胞自噬與疾病的研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2019年02期

相關(guān)博士學位論文 前4條

1 馬梅生;人源PI3KC3復合物結(jié)構(gòu)及其膜結(jié)合特征的研究[D];清華大學;2017年

2 常春美;GAPDH對細胞自噬的調(diào)控作用及其機制研究[D];浙江大學;2014年

3 彭心昭;長春新堿誘導人肝細胞系L02細胞自噬性凋亡的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2001年

4 彭嬌嬌;狂犬病病毒誘導人和鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞自噬的研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學;2016年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 李彧;干擾素對Huh7細胞自噬相關(guān)基因表達影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

2 王世杰;硫氧還蛋白互作蛋白參與HCV誘導細胞自噬以及逃避宿主固有免疫[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2018年

3 白鴿;HRS對小型豬腹腔鏡肝IRI合并肝部分切除術(shù)細胞自噬影響的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2018年

4 李祺瑞;細胞自噬在LPS介導的小鼠內(nèi)毒素休克模型中的作用及其機制[D];華中科技大學;2017年

5 李娜;MRTF-A調(diào)控miR-1273g-3p對Aβ_(25-35)損傷的SH-SY5Y細胞自噬的影響及機制研究[D];武漢科技大學;2018年

6 徐向榮;長鏈非編碼RNA Gas5通過競爭性結(jié)合miR-181c-5p調(diào)控細胞自噬的機制研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2018年

7 屈昱良;細胞自噬模型miRNA差異表達譜的生物信息學分析及miR-129-3p抑制細胞自噬促進BCG胞內(nèi)存活的機制研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2018年

8 馮來鵬;p11對神經(jīng)細胞自噬的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2018年

9 李佳;IL-15對調(diào)節(jié)性T細胞自噬作用影響的研究[D];廣西師范大學;2018年

10 張曉延;腸道病毒71型誘導細胞自噬、凋亡及相互調(diào)控關(guān)系的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

本文編號：2877805