本文關鍵詞：犬骨髓EPCs的分離、鑒定和標記及組織工程化尿道的構建，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：內皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是促進工程化組織和器官血管再生的工具,并且在腫瘤病理學方面也可能成為限制腫瘤生長的作用靶點。目前關于EPCs的研究基本都是以大鼠或者兔作為模型動物,犬作為大型動物能夠給人醫(yī)臨床提供很多參考,但是關于犬EPCs的研究卻很少。因此本研究嘗試用全骨髓培養(yǎng)法和差速貼壁法相結合的方式從犬骨髓中分離EPCs,并對其進行形態(tài)學觀察、表面分子標記鑒定、體外功能分析�？紤]到長段管狀尿道缺損一直是泌尿系統(tǒng)臨床的難題之一,我們嘗試利用犬骨髓來源的EPCs和MSCs(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)作為種子細胞,人羊膜脫細胞基質(decellularized human amniotic scaffolds,dHAS)作為支架材料,構建犬組織工程化尿道,并對其進行組織學檢測,為之后的預臨床研究奠定基礎。試驗結果如下:1.摸索出了一種經(jīng)濟便捷的EPCs分離培養(yǎng)方法,即將全骨髓培養(yǎng)法和差速貼壁法相結合的方式。2.得到了兩種不同類型的犬骨髓EPCs,即早期EPCs和晚期EPCs。3.對兩種EPCs的形態(tài)學、表面分子標記和體外功能進行了分析比較。4.體外構建成功了犬組織工程化尿道。種子細胞在支架材料上分布均勻、增殖速度較快,并且貼合度很高。綜上所述,本研究證明了全骨髓培養(yǎng)法和差速貼壁法相結合是一種便捷可靠的EPCs分離培養(yǎng)方法,并從犬骨髓中分離得到了純度較高的早期EPCs和晚期EPCs,它們具有不同的生物學特性,在血管生成中的功能也不盡相同。以EPCs和BMSCs作為種子細胞,dHAS作為支架材料成功構建了犬組織工程化尿道,經(jīng)過組織學觀察和掃描電鏡檢測三者具有優(yōu)良的相容性,為后續(xù)的體內評估奠定了良好的基礎。
【關鍵詞】：骨髓 內皮祖細胞 組織工程化尿道 犬
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R-33;Q813
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 內皮祖細胞的研究進展9-20
• 1.1 EPCs的發(fā)現(xiàn)9
• 1.2 EPCs的分離方法9-11
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)法10
• 1.2.2 流式細胞儀篩選法10-11
• 1.3 EPCs的功能11
• 1.4 EPCs的動員和歸巢11-14
• 1.4.1 體液因素對EPCs的動員和歸巢的影響11-12
• 1.4.2 性激素對EPCs的動員和歸巢的影響12-13
• 1.4.3 體能鍛煉對EPCs的動員和歸巢的影響13
• 1.4.4 藥物治療對EPCs的動員和歸巢的影響13-14
• 1.5 機體循環(huán)EPCs數(shù)目的臨床意義14-17
• 1.5.1 年齡對循環(huán)EPCs數(shù)目的影響15
• 1.5.2 心血管危險因子對循環(huán)EPCs數(shù)目的影響15-17
• 1.6 EPCs在缺血性疾病治療方面的潛在應用17-18
• 1.7 展望18-20
• 第二章 組織工程化尿道的研究進展20-27
• 2.1 組織工程化尿道的應用背景20
• 2.2 種子細胞20-21
• 2.3 支架材料21-24
• 2.3.1 支架材料的分類22-23
• 2.3.2 支架材料的選擇23-24
• 2.4 用脫細胞基質進行尿道重建24-25
• 2.5 用細胞-脫細胞基質復合物進行尿道重建25-26
• 2.6 展望26-27
• 第三章 犬骨髓EPCs的分離、鑒定和標記27-38
• 3.1 材料與方法27-31
• 3.1.1 材料27-29
• 3.1.2 細胞培養(yǎng)皿的包被29
• 3.1.3 EPCs的分離29
• 3.1.4 EPCs的傳代培養(yǎng)29
• 3.1.5 EPCs的凍存29-30
• 3.1.6 EPCs的復蘇30
• 3.1.7 MTT法繪制EPCs生長曲線30
• 3.1.8 EPCs表面分子標志鑒定30
• 3.1.9 吞噬Dil-ac-LDL和結合FITC-UEA-1 功能檢測30
• 3.1.10 管腔形成試驗30-31
• 3.1.11 EPCs的熒光標記31
• 3.2 結果31-36
• 3.2.1 形態(tài)學觀察31-32
• 3.2.2 生長曲線的繪制32-33
• 3.2.3 表面分子標記鑒定33-34
• 3.2.4 Dil-ac-LDL攝取及FITC-UEA-1 結合能力檢測34-35
• 3.2.5 管腔形成試驗35
• 3.2.6 EGFP標記35-36
• 3.3 討論36-38
• 3.3.1 EPCs來源的選擇36
• 3.3.2 差速貼壁法36
• 3.3.3 EPCs的鑒定36-37
• 3.3.4 本研究存在的問題及努力方向37-38
• 第四章 犬組織工程化尿道的構建38-43
• 4.1 材料與方法38-40
• 4.1.1 材料38-39
• 4.1.2 組織工程化尿道的構建39-40
• 4.1.3 組織工程化尿道的檢測40
• 4.2 結果40-41
• 4.2.1 組織工程化尿道的構建40
• 4.2.2 組織工程化尿道的檢測40-41
• 4.3 討論41-43
• 4.3.1 組織工程化尿道的應用前景41
• 4.3.2 dHAS的優(yōu)勢41-42
• 4.3.3 種子細胞的分化42
• 4.3.4 組織工程化尿道的血管化和組織相容性42
• 4.3.5 組織工程化尿道長度的選擇42
• 4.3.6 本研究存在的問題及未來努力方向42-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

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本文編號：287206