補(bǔ)體系統(tǒng)在機(jī)體抗感染第一線防御中起重要作用，另一方面，補(bǔ)體異常(包括程度和部位)活化也參與許多疾病的發(fā)生和發(fā)展。因此，抗補(bǔ)體治療一直是補(bǔ)體學(xué)研究中的重要領(lǐng)域之一。人們先后嘗試過許多抑制補(bǔ)體激活的途徑，但都存在或多或少的問題。目前的焦點(diǎn)集中在新一代基因工程補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白(complement regulation protein，CRP)的研制，但難度很大。本研究另辟蹊徑，以補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑始動分子C1q為靶標(biāo)，采用噬菌體肽庫技術(shù)，親和篩選能與C1q結(jié)合的噬菌體克隆，研制可抑制補(bǔ)體激活的C1q模擬短肽。 我們用IgG-Sepharose 4B親和層析將C1q與C1r_2C1s_2分離，然后以DEAE-Sephacel離子交換層析將C1r和C1s分離，用C1q McAb-Sepharose 4B親和層析將C1q進(jìn)一步純化，在分離C1r和C1s的整個過程中加入蛋白水解酶抑制劑PMSF和NPGB，并控制溫度在4℃、pH6.1、無二價陽離子的條件下，得到高度純化的C1q和酶原形式C1r和C1s。然后，采用噬菌體肽庫技術(shù)，以C1q為釣餌蛋白，從12肽庫和環(huán)7肽庫中親和篩選能與C1q結(jié)合的噬菌體克隆，經(jīng)ELISA、U937細(xì)胞配體結(jié)合抑制試驗(yàn)、AIgG競爭抑制試驗(yàn)及DNA測序，獲得了9個具C1q抑制活性克隆的DNA序列，其相應(yīng)的氨基酸序列為：WYEGPFTLYTWP、HWDPFSLSAYFP、LTQHNSPFFLLP、TSNPFFLWYPQP、QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP，它們可能模擬C1qR和／或IgG的C1q結(jié)合表位并抑制C1q的活性。這些結(jié)果，為研制新型肽類藥物進(jìn)行抗補(bǔ)體治療奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

sns一PAGE分析elq、eir和elsFig·4Non一redueingandredueingSDS一PAGEanalysisofClq，ClrandCls

5WestemBlot鑒定Clq、Clr和Cls非還原Clq、Clr、Cls經(jīng)SDS一PAGE分離后用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行westemblot分析，結(jié)果如圖5所示。一16一

12一3噬菌體膚庫克隆DNA序列4P12一噬菌體膚庫克隆DNA序列
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本文編號：2867630