Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細(xì)胞命運(yùn)決定，故此與多種生理及病理過程密切相關(guān)。Notch基因廣泛表達(dá)于胚胎發(fā)育過程中的各種組織和各種成熟組織中具有增殖能力的細(xì)胞層，該基因編碼一個(gè)由2753個(gè)氨基酸殘基的Ⅰ型跨膜蛋白分子受體，其配體也是細(xì)胞膜蛋白，稱為Delta。當(dāng)Notch受體受到配體的刺激而激活時(shí)，可以傳導(dǎo)分化抑制信號(hào)。人們將該途徑稱為Notch途徑，Notch途徑中最核心的信號(hào)分子之一為RBP-J。 RBP-J是果蠅促神經(jīng)發(fā)生基因Su(H)(suppressor of hairless)在哺乳動(dòng)物的同源物，RBP-J基因敲除小鼠在胚胎第9天死亡，同時(shí)伴隨一系列異常，包括神經(jīng)發(fā)育過度及體節(jié)發(fā)育的缺陷，說明RBP-J在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。 為進(jìn)一步探討RBP-J的功能，日本京都大學(xué)的Honjo研究組利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選到一個(gè)可以與RBP-J相互作用的新蛋白KyoT，KyoT蛋白有三種不同的剪切體：KyoT1，KyoT2和KyoT3，其中KyoT2可以與RBP-J相互作用抑制其轉(zhuǎn)錄活性。 付包馳 蘿 回 旱 匡大紗甩亡學(xué)應(yīng)恃大2咖．53 為深入研究KyoTh在NOtCh－RBPJK途徑中的可能作用及其作用機(jī)制，本實(shí) 驗(yàn)室以 KyOTh為誘餌蛋白通過酵母雙雜交得到人類緊密連接蛋白 ZOE。緊密連 接Oigh junchon）又稱封閉小帶仁onula occludens），主要是存在于脊椎動(dòng)物上皮 細(xì)胞間以及內(nèi)皮細(xì)胞間的連接，其主要功能為封閉相鄰細(xì)胞間的縫隙，限制一些 大分子在細(xì)胞間隙中的自由擴(kuò)散，同時(shí)防止膜蛋白的側(cè)向流動(dòng)，使膜蛋白定位于 質(zhì)膜的一定區(qū)域，從而維持細(xì)胞極性。ZO－2位于緊密連接處的質(zhì)膜內(nèi)表面，一方 面與構(gòu)成緊密連接的跨膜蛋白相互作用，另一方面與細(xì)胞骨架發(fā)生聯(lián)系。因此 ZO－2的生物學(xué)作用可能參與緊密連接形成和功能調(diào)節(jié)，經(jīng)細(xì)胞骨架而影響細(xì)胞的 形態(tài)和運(yùn)動(dòng)。 本實(shí)驗(yàn)通過酵母雙雜交及 GST pull－down as腳驗(yàn)證了 KyO TZ蛋白與 ZOz蛋 白在體外的相互作用，并通過酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)初步確定其相互作用的位點(diǎn)。即 ZO4可以與 KyOTZ的 LM結(jié)構(gòu)域發(fā)生特異性的結(jié)合，而不與 KyOTh的 LIMI 結(jié)構(gòu)域或 KyOTI的 LIMI及 LIMZ結(jié)構(gòu)域相互作用。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：Q51
【文章目錄】：
英文縮寫詞表
中文摘要
英文摘要
文獻(xiàn)回顧
    1. 研究蛋白質(zhì)相互作用的方法
    2. Notch信號(hào)途徑
    3. LIM結(jié)構(gòu)域蛋白KyoT2
    4. 細(xì)胞間連接、緊密連接及緊密連接蛋白
實(shí)驗(yàn)材料
    1. 菌種及質(zhì)粒
    2. 主要試劑
    3. 主要儀器
實(shí)驗(yàn)方法
    1. 克隆構(gòu)建
    2. 序列測(cè)定及分析
    3. 蛋白表達(dá)純化
    4. 酵母雙雜交
    5. GST pull-down
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. 6號(hào)序列的測(cè)定
    2. 6號(hào)序列的分析結(jié)果
    3. KyoT2的原核表達(dá)及純化
    4. 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證KyoT2與ZO-2的相互作用
    5. GST pull-down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證KyoT2與ZO-2的相互作用
    6. 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證KyoT2與ZO-2的相互作用位點(diǎn)
討論
    1. 關(guān)于LIM結(jié)構(gòu)域蛋白及KoyT2分子
    2. 關(guān)于緊密連接及ZO-2分子
    3. 關(guān)于KyoT2與ZO-2的相互作用
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2867332