人精子膜蛋白cDNA(HSD-1)的表達(dá)和功能研究
發(fā)布時(shí)間:2020-11-02 04:45
免疫避孕是指應(yīng)用免疫學(xué)的原理和方法對(duì)人類(lèi)生育力進(jìn)行調(diào)控,它是近十多年來(lái)世界各地科學(xué)工作者正在積級(jí)進(jìn)行研究的一類(lèi)新的避孕方法。 大量的研究報(bào)道表明,生殖系統(tǒng)的許多成分,如精子、卵子、生殖激素等均具有抗原性。針對(duì)機(jī)體精子抗原、卵表面抗原以及生殖激素抗原發(fā)生的免疫反應(yīng)會(huì)干擾生育的生理調(diào)節(jié)過(guò)程,這是免疫避孕的理論基礎(chǔ)。 應(yīng)用免疫學(xué)的方法調(diào)控人類(lèi)生育力可以有幾種不同的途徑。其中最有實(shí)用意義的途徑是應(yīng)用生殖系統(tǒng)的抗原進(jìn)行主動(dòng)免疫。即應(yīng)用疫苗進(jìn)行免疫。這一途徑的優(yōu)點(diǎn)在于一次或數(shù)次免疫后能誘發(fā)較長(zhǎng)時(shí)間的免疫力,它的抗生育效應(yīng)是通過(guò)誘發(fā)的抗體或活化的淋巴細(xì)胞或兩者的共同作用而實(shí)現(xiàn)的。 應(yīng)用疫苗進(jìn)行避孕的一個(gè)最關(guān)鍵的問(wèn)題是能發(fā)現(xiàn)一個(gè)精子特異的,且具有強(qiáng)免疫原性的抗原。本課題組從70年代末期開(kāi)始涉獵這一研究領(lǐng)域。到目前已經(jīng)純化了數(shù)種具有強(qiáng)免疫原性的精子蛋白;克隆了一些與生育過(guò)程相關(guān)的蛋白的cDNA。其中一個(gè)cDNA HSD-1,是應(yīng)用含有抗精子抗體的不育病人的血清從人睪丸cDNA文庫(kù)中篩選得到的。提示這個(gè)基因編碼的蛋白質(zhì)可能在生殖過(guò)程中起作用。本文在此基礎(chǔ)上對(duì)HSD-1cDNA及其可能含有抗原決定簇的片
【學(xué)位單位】:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位年份】:1997
【中圖分類(lèi)】:R321
【部分圖文】:
或HindHI酶切,分別可以切出約550bp的片段。因此可以確定pQE30艦sD一l(55obp)為構(gòu)建正確的重組質(zhì)粒。此外,我們又對(duì)此重組質(zhì)粒進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證。圖8為pQE3o艦SD一l(550bP)的測(cè)序結(jié)果。Lanel,LambdaDNA/HindlllMarkerLaneZ,pQE3oH/SD一l(550bp)質(zhì)粒Lane3,PQE30H/SD一1(55ObP)B/amHILane4,PQE30舊SD一I(550bP)H/indlllLanes,PBR322/BstNIMarker2345圖7,pQE3o沮SD一l(55obp)重組質(zhì)粒的酶切鑒定一一一一一.一8l
中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文結(jié)果將經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序后確定為正確的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入EochM巧菌.進(jìn)行PITG誘導(dǎo)表達(dá)。12%SDS一PAGE檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)情況,見(jiàn)圖3Lna4ec由電泳圖譜可見(jiàn)pQE30艦SD一1(55b0P)在PITG誘導(dǎo)3小時(shí)后,得到高效表達(dá),表達(dá)蛋白占細(xì)菌SDS一裂解液總蛋白的25.5%,圖o9
巾國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文4抗HSD一1多克隆抗體的制備抗Hsn一l多克隆抗體由美國(guó)Inc(Denver,pA)制備。1.smg純化的表達(dá)備抗體,ELISA法測(cè)得抗體的滴度為1x為了進(jìn)一步鑒定抗體的特異性,認(rèn)衛(wèi)STERNBLOT,抗體的稀釋度為1:不同大小的表達(dá)蛋白5k5d、2盈kd和14kd
【參考文獻(xiàn)】
本文編號(hào):2866588
【學(xué)位單位】:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位年份】:1997
【中圖分類(lèi)】:R321
【部分圖文】:
或HindHI酶切,分別可以切出約550bp的片段。因此可以確定pQE30艦sD一l(55obp)為構(gòu)建正確的重組質(zhì)粒。此外,我們又對(duì)此重組質(zhì)粒進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證。圖8為pQE3o艦SD一l(550bP)的測(cè)序結(jié)果。Lanel,LambdaDNA/HindlllMarkerLaneZ,pQE3oH/SD一l(550bp)質(zhì)粒Lane3,PQE30H/SD一1(55ObP)B/amHILane4,PQE30舊SD一I(550bP)H/indlllLanes,PBR322/BstNIMarker2345圖7,pQE3o沮SD一l(55obp)重組質(zhì)粒的酶切鑒定一一一一一.一8l
中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文結(jié)果將經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序后確定為正確的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入EochM巧菌.進(jìn)行PITG誘導(dǎo)表達(dá)。12%SDS一PAGE檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)情況,見(jiàn)圖3Lna4ec由電泳圖譜可見(jiàn)pQE30艦SD一1(55b0P)在PITG誘導(dǎo)3小時(shí)后,得到高效表達(dá),表達(dá)蛋白占細(xì)菌SDS一裂解液總蛋白的25.5%,圖o9
巾國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文4抗HSD一1多克隆抗體的制備抗Hsn一l多克隆抗體由美國(guó)Inc(Denver,pA)制備。1.smg純化的表達(dá)備抗體,ELISA法測(cè)得抗體的滴度為1x為了進(jìn)一步鑒定抗體的特異性,認(rèn)衛(wèi)STERNBLOT,抗體的稀釋度為1:不同大小的表達(dá)蛋白5k5d、2盈kd和14kd
【參考文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前4條
1 繆時(shí)英,李月華,周荔申,陳雅娣,白云,王琳芳,嚴(yán)緣昌;一種人精子膜蛋白基因的克隆與鑒定[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1990年06期
2 沙國(guó)柱;精子生育相關(guān)抗原研究進(jìn)展[J];男性學(xué)雜志;1996年01期
3 梁植權(quán),王琳芳,繆時(shí)英,趙敏順,曹淑蘭,吳炳瑛,柯林林;精子膜蛋白的研究Ⅰ.具有同種抗原性的兔精子膜蛋白A的分離[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1980年03期
4 王琳芳,繆時(shí)英,曹淑蘭,吳炳瑛,柯林林,梁植權(quán);精子膜蛋白的研究——Ⅲ、兔精子膜蛋白“A”的定位及其酯酶活性的觀察[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1982年02期
本文編號(hào):2866588
本文鏈接:http://www.sikaile.net/yixuelunwen/binglixuelunwen/2866588.html
最近更新
教材專(zhuān)著