目的通過經(jīng)尾靜脈或腹腔兩種方式給NOD/SCID小鼠注射正常人外周血單核細胞(PBMCs)的方式,來探究對于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型兩種移植方式建模效果的比較,隨后對該模型進行HIV病毒感染的鑒定。方法將9只雌性NOD/SCID小鼠給予亞致死劑量全身照射后,分為3組,實驗Ⅰ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,腹腔注射0.5 mLPBMC細胞懸液;實驗Ⅱ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,尾靜脈注射0.2mLPBMC細胞懸液;實驗Ⅲ組:3只雌性NOD/SCID小鼠,注射0.2mLRPMI 1640細胞培養(yǎng)液,作為Ⅰ組及Ⅱ組的實驗對照。通過觀察移植細胞后小鼠的存活時間與生活狀態(tài),并施以流式細胞技術鑒定小鼠眼眶外周血中CD45~+、CD4~+、CD8~+等人源化細胞的比例。另取4只NOD/SCID小鼠進行腹腔移植3天后,腹腔注射HIV感染的PBMCs細胞并以未移植的NOD/SCID小鼠作為對照,在感染后第5wk采集小鼠眼眶血,流式細胞技術及免疫熒光定量PCR方法分別檢測其CD45~+、CD4~+、CD8~+等人源化細胞的比例及病毒滴度。結果兩種方式注射正常人PBMC細胞至小鼠內2～10周后,實驗組小鼠體內均檢測到人源化免疫細胞的浸潤,各細胞比例隨小鼠移植時間而增加;但相比尾靜脈注射,腹腔注射鼠內人源性免疫細胞比例明顯較高;此外二種移植方式小鼠存活時間均達10wk,即成功建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型。隨后對該人鼠嵌合模型進行腹腔注射HIV感染的PBMC,第5周免疫熒光定量PCR能檢測到病毒滴度,發(fā)現(xiàn)病毒滴度上升,同時結合流式細胞技術分析隨著病毒滴度上升,CD45~+分子比例下降且CD4~+/CD8~+1。結論應用尾靜脈或腹腔注射正常人外周血單個核細胞(PBMCs)的方法,均可建立人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型;但我們發(fā)現(xiàn)相比尾靜脈注射方式,腹腔注射對于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型有著明顯的優(yōu)勢。同時通過腹腔注射HIV感染的PBMC至該模型,HIV病毒可以成功地被感染。這為艾滋病體外潛伏機制的研究和抗病毒藥物篩選提供了良好的動物模型。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物及細胞
        1.1.2 實驗試劑與儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 人外周血單核細胞 （PBMCs） 的分離
        1.2.2 移植細胞的準備以及注射
        1.2.3 NOD/SCID小鼠的人源化小鼠模型的建立
        1.2.4 HuPBMCs-NOD/SCID小鼠契合模型的鑒定
        1.2.5 感染HIV-1
        1.2.6 HIV-1病毒載量檢測
        1.2.7 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 NOD/SCID小鼠移植后存活情況
    2.2 人外周血單個核細胞在NOD/SCID小鼠體內移植后細胞分化
    2.3 人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型的建立
    2.4 HIV感染人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型的鑒定
3 討論

【參考文獻】

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本文編號：2865085