目的探討血小板衍生生長因子受體(PDGFR)信號通路對小鼠腦星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)體系增殖的影響。方法取出生1～3 d的小鼠乳鼠大腦皮質培養(yǎng)星形膠質細胞,取腦膜培養(yǎng)成纖維細胞,免疫細胞化學熒光染色膠質纖維酸性蛋白(GFAP)鑒定星形膠質細胞純度,染色纖連蛋白(FN)鑒定成纖維細胞純度。通過向小鼠腦星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)細胞體系中加入細胞因子血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB)刺激細胞或抑制劑AG1296進行干預,觀察各組細胞增殖情況,Western blot檢測共培養(yǎng)細胞系中p-PDGFR-β、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)的表達變化。結果鑒定結果顯示星形膠質細胞和成纖維細胞的細胞純度達到90%。顯微鏡下觀察顯示,加入PDGF-BB后星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)體系增殖明顯并形成團塊,給予抑制劑AG1296則增殖受到抑制,團塊明顯減少。Western blot結果顯示加入PDGF-BB時,p-PDGFRβ、p-Akt表達增多(P0.01);給予抑制劑AG1296則表達減少(P0.05)。結論 PDGFR信號通路促進體外小鼠腦星形膠質細胞和成纖維細胞的增殖。
【部分圖文】：

４期裴丹，李洪鵬．ＰＤＧＦＲ信號通路促進星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)時細胞簇的成團效應數字平臺：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公眾號：西安交通大學學報醫(yī)學版２結果２．１免疫熒光染色鑒定星形膠質細胞及成纖維細胞免疫熒光ＧＦＡＰ和ＦＮ染色結果，傳代３代以上的小鼠星形膠質細胞ＧＦＡＰ和成纖維細胞ＦＮ陽性表達高于９５％（圖１）。據此確認體外培養(yǎng)的腦皮質星形膠質細胞和成纖維細胞純度可進行后續(xù)實驗。圖１小鼠腦星形膠質細胞和成纖維細胞免疫熒光染色結果Ｆｉｇ．１Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｍｏｕｓｅｂｒａｉｎａｓｔｒｏ－ｃｙｔｅｓａｎｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓＡ：星形膠質細胞標記物ＧＦＡＰ蛋白陽性表達為紅色；Ｂ：成纖維細胞標記物ＦＮ蛋白陽性表達為綠色。２．２ＰＤＧＦ－ＢＢ刺激共培養(yǎng)體系的細胞增殖當腦膜成纖維細胞和星形膠質細胞共培養(yǎng)時，未加任何處理因素時，單獨生長形成獨立平坦的集落（圖２Ａ）。用ＰＤＧＦ－ＢＢ刺激時，細胞明顯增殖并聚集生長形成結節(jié)（圖２Ｂ）。說明ＰＤＧＦ－ＢＢ可促進星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)體系的細胞增殖。圖２ＰＤＧＦ－ＢＢ對腦星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)體系增殖的影響Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆＰＤＧＦ－ＢＢｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｓｔｒｏ－ｃｙｔｅａｎｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍＡ：空白對照組，即共培養(yǎng)體系未加任何處理因素；Ｂ：１０ｎｇ／ｍＬＰＤＧＦ－

圖２ＰＤＧＦ－ＢＢ對腦星形膠質細胞和成纖維細胞共培養(yǎng)體系增殖的影響
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