本文關鍵詞：脂多糖刺激臍帶間充質(zhì)干細胞上調(diào)IL-1Ra、IL-37分泌的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)對臍帶間充質(zhì)干細胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素-1受體拮抗劑(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)、白介素-37(interleukin-37,IL-37)的影響。方法(1)采用組織塊法從臍帶華通膠組織中分離培養(yǎng)UC-MSCs。(2)流式細胞術檢測UC-MSCs表面標志物的表達,鑒定UC-MSCs;檢測UC-MSCs細胞周期。(3)CCK-8(Cell Counting Kit)法檢測UC-MSCs的對數(shù)生長期。(4)實時定量熒光PCR(Real-time PCR)檢測UC-MSCs上TLR4 m RNA的表達。(5)LPS不同劑量刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme lin-ked immunosorbent assay,ELISA)分別從m RNA與蛋白水平檢測UC-MSCs對IL-1Ra、IL-37的分泌。(6)LPS不同時間刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及ELISA分別從m RNA與蛋白水平檢測UC-MSCs對IL-1Ra、IL-37的分泌。(7)TAK-242阻斷TLR4后,Real-time PCR及ELISA分別從m RNA與蛋白水平檢測其對LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37的影響。結果采用組織塊法從臍帶華通膠組織分離培養(yǎng)UC-MSCs,于75cm2塑料培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),原代培養(yǎng)7~10 d后,觀察到組織周邊爬出貼壁細胞,呈長梭形。流式細胞術檢測UC-MSCs表面標志物,UC-MSCs陽性表達CD29和CD105,不表達CD14和CD34,符合UC-MSCs的生物學特征。細胞生長曲線結果表明,UCMSCs傳代培養(yǎng)在48-72 h進入對數(shù)生長期。流式細胞術檢測UC-MSCs細胞周期,觀察到G0/G1期占78.8%,S期占11.6%,G2/M期占9.6%,結果表明UC-MSCs大部分處于靜止狀態(tài),其潛在的自我更新和增殖能力仍很強。Real-time PCR觀察到UC-MSCs上表達TLR4 m RNA。1μg/m L LPS作用于UC-MSCs后,從m RNA與蛋白水平檢測UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37呈時間依賴效應(P0.05)。TAK-242阻斷TLR4后,LPS刺激UC-MSCs(即TAK-242+LPS組)較未阻斷組(LPS組)分泌IL-1Ra、IL-37水平減少,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),結果表明UC-MSCs對IL-1Ra與IL-37的分泌與TLR4激活有關。結論從臍帶華通膠組織中分離培養(yǎng)出原代細胞,經(jīng)鑒定為UC-MSCs;UC-MSCs陽性表達TLR4 m RNA;LPS可刺激UC-MSCs分泌抑炎細胞因子IL-1Ra、IL-37呈時間依賴效應,該過程主要依賴于TLR4。結果提示在炎癥環(huán)境中,UC-MSCs可能通過分泌抑炎細胞因子IL-1Ra、IL-37來調(diào)節(jié)免疫活動,發(fā)揮抑炎效應。
【關鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細胞 Toll樣受體4 白介素-1受體拮抗劑 白介素-37
【學位授予單位】：成都醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 臍帶間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及生物學性質(zhì)研究13-24
• 1 引言13
• 2 材料與方法13-18
• 2.1 主要儀器13-14
• 2.2 主要試劑14-15
• 2.3 實驗方法15-18
• 3 實驗結果18-23
• 3.1 臍帶間充質(zhì)干細胞體外分離及其培養(yǎng)18-20
• 3.2 臍帶間充質(zhì)干細胞傳代培養(yǎng)20
• 3.3 鑒定臍帶間充質(zhì)干細胞20-21
• 3.4 臍帶間充質(zhì)干細胞的對數(shù)生長期21-22
• 3.5 臍帶間充質(zhì)干細胞的細胞周期22-23
• 4 小結23-24
• 第二部分 脂多糖刺激臍帶間充質(zhì)干細胞上調(diào)IL-1Ra、IL-37分泌的研究24-47
• 1 引言24
• 2 材料與方法24-35
• 2.1 實驗儀器24-26
• 2.2 實驗試劑26-27
• 2.3 實驗方法27-35
• 3 實驗結果35-46
• 3.1 臍帶間充質(zhì)干細胞上表達TLR4 mRNA35
• 3.2 LPS不同劑量刺激UC-MSCs表達IL-1Ra、IL-37 mRNA35-37
• 3.3 LPS不同劑量刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白37-40
• 3.4 LPS刺激UC-MSCs表達IL-1Ra、IL-37 mRNA呈時間依賴效應40-41
• 3.5 LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白呈時間依賴效應41-43
• 3.6 TLR4介導臍帶間充質(zhì)干細胞分泌IL-1Ra、IL-3743-46
• 4 小結46-47
• 討論47-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-57
• 文獻綜述57-68
• 參考文獻63-68
• 附錄68-70
• 攻讀學位期間的研究成果70-71
• 致謝71

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本文編號：285323