目的：探討tTG在肝細(xì)胞損傷和增生中的表達(dá)和分布規(guī)律，揭示tTG的雙重作用機(jī)制，豐富信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的研究?jī)?nèi)容，為肝臟疾病的防治提供新的理論依據(jù)。 方法：以大鼠原代肝細(xì)胞為材料，給低濃度乙醇制造肝細(xì)胞損傷模型。同時(shí)另設(shè)防治組分別給PNLP、Putr、CsA，檢測(cè)其對(duì)乙醇引起的肝細(xì)胞損傷的影響。在倒置顯微鏡下觀察不同處理組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；通過(guò)MTT比色法檢測(cè)肝細(xì)胞增殖活性；用Hoechst熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡現(xiàn)象；運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定不同處理組細(xì)胞的tTG的陽(yáng)性表達(dá)率；運(yùn)用Western blot分析方法檢測(cè)tTG在細(xì)胞內(nèi)不同部位的分布情況。 結(jié)果：1．MTT比色顯示：用200mM濃度的乙醇處理大鼠原代肝細(xì)胞24h后，細(xì)胞群增殖活性明顯受抑制，與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)，而PNLP(200uM)，Putr(100uM)，CsA(10uM)可使細(xì)胞群增殖活性回升，尤在PNLP組及CsA組細(xì)胞增生活躍，與乙醇組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)。2．Hoechst熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡計(jì)數(shù)結(jié)果：在50mM乙醇處理18h后大鼠肝細(xì)胞已有較多凋亡細(xì)胞可進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，其凋亡細(xì)胞率分別為乙醇組15.4％，PNLP(200uM)組9.3％，Putr(100uM)組5.4％，CsA(10uM)組4.6％，正常對(duì)照組2.9％。乙醇組顯著高于其余各組(均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01或P＜0.05)。3．tTG免疫細(xì)胞化學(xué)圖像分析：用50mM濃度乙醇處理大鼠肝細(xì)胞18h后，tTG蛋白表達(dá)已有顯著增高，各組積分光密度不同，乙醇組97.632，PNLP(200uM)組103.87，與正常對(duì)照組(64.557)相比 延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 顯著增高(均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P0.01);而Putr(100uM)組54.595，CsA(10田隨) 組40‘464，與乙醉組相比顯著降低(均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P0.01)。4.細(xì)胞質(zhì)蛋白 中tTG的W七stem blot分析:各種處理分別同時(shí)作用于大鼠肝細(xì)胞18h后提取細(xì) 胞質(zhì)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，其tTG的PAGE電泳條帶的平均光密度測(cè)量值分別為正常 組0.81，乙醇(50mM)組0.90，PNLP(200uM)組0.84，Putr(lmM)組0.66， CsA(3uM)組0.77，CsA(suM)組0.75。乙醇組明顯高于其余各組(除與PN毛P 組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，與其余各組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)上均有顯著性差異，P0.01或 P0.05)，且CsA組顯示一定的負(fù)性劑量依賴關(guān)系。5.細(xì)胞核蛋白中tTG的 W七stem blot分析:各種處理分別同時(shí)作用于大鼠肝細(xì)胞18h后提取細(xì)胞核蛋白 進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量其tTG的PAGE蛋白電泳條帶的平均光密度值結(jié)果不同，乙醇 (50mM)組為1 .02，高于正常對(duì)照組的0.9(統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異，P0.05); 而Putr(l mM)組為0 .74，顯著低于乙醇組(統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異，P0.01)。 6.細(xì)胞膜蛋白中tTG的W七stem blot分析:各種處理分別同時(shí)作用于大鼠肝細(xì) 胞18h后提取細(xì)胞膜蛋白進(jìn)行檢測(cè)，其tTG的PAGE蛋白電泳條帶的平均光密 度值分別為正常對(duì)照組a25，乙醇(100血M)組0.19，乙醇加PNLP (100n1M+200uM)組0.32，PNIP(ZO0uM)組0.33。乙醇加PNLP組明顯高 于乙醇組及正常對(duì)照組(統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，P0.01或P0.05);乙醇組顯 著低于正常對(duì)照組(統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，P005)。 結(jié)論:1.CsA可抑制乙醇引起的細(xì)胞質(zhì)tTG的高表達(dá)及細(xì)胞凋亡的發(fā)生， 促進(jìn)肝細(xì)胞增生，提示tTG參與細(xì)胞凋亡的機(jī)制與線粒體及細(xì)胞色素C密切相 關(guān);2.乙醇引起的 tTG在細(xì)胞質(zhì)中的高表達(dá)可使其本身向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位，應(yīng)用 Putr可抑制tTG向核內(nèi)轉(zhuǎn)位，從而減少細(xì)胞損傷:3.PN毛P可引起細(xì)胞增生及細(xì) 胞膜tTG的高表達(dá)，tTG的膜分布可抑制其在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中時(shí)引起的對(duì)細(xì) 胞的損傷作用，這可能與在有限表達(dá)量的范圍內(nèi)tTG的大量膜轉(zhuǎn)移減少了細(xì)胞 質(zhì)游離的tTG含量，從而降低tTG向核內(nèi)轉(zhuǎn)位有關(guān);4.tTG的雙重生物學(xué)活性 主要是通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)向不同部位的轉(zhuǎn)移來(lái)發(fā)揮其不同活性和調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)細(xì) 胞凋亡的發(fā)生或參與細(xì)胞增生。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R363
【部分圖文】：

而用tTG交聯(lián)活性抑制劑Putr與乙醇同時(shí)作用于細(xì)胞后，核內(nèi)tTG的含量反而下降，與正常組相比下降達(dá)17.8%，與乙醇組相比下降達(dá)27.5%(統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，P<001)。(圖16，圖17)圖16圖17:不同處理引起的細(xì)胞核蛋白中t勺G含量的變化Figl7.Alte段donoftTGeontantineeUularnuclearOroteinatthediffe代ntt代atl”e爪

6.肝細(xì)胞膜蛋白中“G的westernblot肝細(xì)胞膜蛋白中tTG的隊(duì)GE蛋白條帶的平均常對(duì)照組0.25，乙醇組0.19，乙醇加PNLP組0.32，原代肝細(xì)胞18h后，tTG在膜蛋白中的含量明顯降低，相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著的差異，P<0.05)，PNLP與乙用于細(xì)胞后細(xì)胞膜內(nèi)分布的tTG含量顯著增高，增%、73.7%(統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異，P<0.01)，28%、32%(統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，P<0.05或P<0.圖18
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2852633