內(nèi)皮細(xì)胞對血管的調(diào)控作用近年來受到人們的廣泛關(guān)注。在人 體的各種血管中，根據(jù)其是否有神經(jīng)支配，可以分成無神經(jīng)支配血 管和有神經(jīng)支配血管兩類，這兩類血管的調(diào)控機(jī)制存在差異，內(nèi)皮 細(xì)胞在這兩類血管的調(diào)控中起的作用也不一樣。故研究內(nèi)皮細(xì)胞對 血管的調(diào)控機(jī)制，應(yīng)該區(qū)分所要研究的血管有無神經(jīng)支配，而目前 人體有、無神經(jīng)支配的血管模型少見報道，有關(guān)無神經(jīng)支配血管的 調(diào)控機(jī)制的報道也為數(shù)不多。本研究擬用HE染色、電鏡、免疫組 化、免疫熒光、RT-PCT、劃痕負(fù)載染料遷移等方法研究人腸系膜下 動脈的分支血管及臍血管的細(xì)微、超微結(jié)構(gòu)以及血管壁中多種肽能 及單胺能神經(jīng)纖維的分布，擬用其建立人有、無神經(jīng)支配血管模型， 并對無神經(jīng)支配的臍血管的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行探討。 大量的研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞合成、分泌的物質(zhì)還有很多為我們 所不知，為了更好的了解無神經(jīng)支配的臍血管中內(nèi)皮細(xì)胞正常的生 理功能，有必要對其分泌的物質(zhì)作一個總體分析。本研究的另一目 的擬收集、濃縮HUVEC的無血清培養(yǎng)上清，采用毛細(xì)管電泳檢測其 中蛋白質(zhì)的種類、含量，經(jīng)蛋白質(zhì)低溫層析對其中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分 離純化，并對它們的性質(zhì)、功能進(jìn)行初步探討。 本研究取得的主要結(jié)果如下： 1.用HE染色方法觀察人臍血管和腸系膜下動脈的分支血管 的結(jié)構(gòu)，我們發(fā)現(xiàn)臍動脈和與其直徑相當(dāng)?shù)哪c系膜下動脈的分支在 結(jié)構(gòu)上存在一些差別。和腸系膜下動脈的分支相比，臍動脈中膜平 滑肌的層數(shù)明顯較多，管壁較厚而管腔較小。平滑肌的排列方式也 存在差異，腸系膜血管的中膜平滑肌幾乎均呈環(huán)行排列，在臍動脈 中，中膜平滑肌的外層也呈環(huán)行排列，而靠近內(nèi)膜的平滑肌細(xì)胞的 排列方向則是朝向血管腔面。在電鏡觀察這些血管的內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié) 構(gòu)時發(fā)現(xiàn)，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和發(fā)達(dá) 的高爾基體，提示其有活躍的合成蛋白質(zhì)的功能，而在臍動脈和腸 系膜分支動脈的內(nèi)皮細(xì)胞中，除較多線粒體和發(fā)達(dá)的高爾基體外， 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少見，卻有異常豐富的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，其功能意義尚不 清楚。 2．利用兔疫組化方法證實，在人腸系膜下動脈的分支血管 管壁中存在U ＊NPY、SP等肽 自及5叫T單胺 商 的神 經(jīng)纖維，這些 纖維主要分布于血管的外膜及中外膜交界處，而在臍血管的中外膜 中未見這些神經(jīng)纖維，該結(jié)果提示，前者可以作為有神經(jīng)支配的人 血管模型，而后者可以作為無神經(jīng)支配的人血管模型。 3．采用兔疫組化、免疫熒光的方法證實在體和離體的臍血管 內(nèi)皮細(xì)胞中均表達(dá)eNOS、VIP、SP、NPY，提示臍血管內(nèi)皮細(xì)胞能 通過巳DRF途徑或旁分泌多種VPS途徑來調(diào)控臍血管的張力。 4．用免疫熒光、RT－PCR方法證實HUVEC能表達(dá)CX43蛋白及 mRNA；在劃痕負(fù)載染料遷移實驗中我們發(fā)現(xiàn)，小分子量的熒光黃染 料能從劃傷的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到正常的細(xì)胞中去，該實驗證實HUVEC能通 過縫隙連接來傳遞一些小分子物質(zhì)，為HUVEC之間經(jīng)縫隙連接實現(xiàn) 直接通訊提供了重要的形態(tài)學(xué)證據(jù)。 5．用毛細(xì)管電泳方法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株eec304細(xì)胞 的無血清培養(yǎng)上清，發(fā)現(xiàn)其中有多種蛋白質(zhì)成分，根據(jù)其分子量大 小主要分成6個區(qū)帶。經(jīng)蛋白質(zhì)低溫層析分離出其中3種蛋白質(zhì)， 分子量依次為13、17、70kD，其中分子量為13、17kD的物質(zhì)對內(nèi) Vlll 皮細(xì)胞的生長有促進(jìn)作用，而分子量為70kD的物質(zhì)對細(xì)胞的生長 末見明顯影響。 本實驗結(jié)果表明，人腸系膜下動脈的分支血管的管壁中有肽能 及單胺能神經(jīng)纖維的分布，而臍血管中則沒有這些神經(jīng)纖維，前 者可以作為人有神經(jīng)支配的血管模型，而后者可以作為人無神經(jīng)支 配的血管模型。在無神經(jīng)支配的臍血管中。內(nèi)皮細(xì)胞可以通過兩種 胞間通訊的方式調(diào)節(jié)臍血管的功能：通過旁分泌NO及多種VPS途 徑來調(diào)節(jié)血管張力；通過縫隙連接途徑來在相鄰內(nèi)皮細(xì)胞間傳逸信 息以及保持內(nèi)皮細(xì)胞功能的同步性。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞能合成、分 泌多種蛋白質(zhì)成分，它們的功能多樣，其中分子量為13kD、17kD 的物質(zhì)有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用，而分子量為70kD的物質(zhì)對內(nèi) 皮細(xì)胞的生長未見明顯影響，這些物質(zhì)更多的性質(zhì)和功能還需要進(jìn) 一步的研究。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R329.2
【文章目錄】：
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論文正文：人臍血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞間通訊及其分泌蛋白質(zhì)檢測的初步研究
    總前言
    本實驗中使用的主要試劑來源
    第一部分 有、無神經(jīng)支配的人血管模型的建立以及內(nèi)皮細(xì)胞分泌血管活性物質(zhì)實現(xiàn)對人臍血管的調(diào)控
        一、 有、無神經(jīng)支配的人血管模型的建立
        二、 體外培養(yǎng)的HUVEC分泌血管活性物質(zhì)的研究
        三、 討論
    第二部分 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞之間縫隙連接的研究
        一、 材料與方法
        二、 結(jié)果
        三、 討論
    第三部分 HUVEC無血清條件培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的初步檢測
        一、 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ecv304細(xì)胞無血清條件培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的分離與檢測
        二、 N01、N08、N012對ecv304細(xì)胞生長的影響
        三、 討論
全文總結(jié)
致謝
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論文參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 內(nèi)皮細(xì)胞的胞間通訊
    綜述參考文獻(xiàn)
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1 劉運來,徐倫山,姚忠祥,蔡文琴;Sin-1對內(nèi)皮細(xì)胞生長及細(xì)胞骨架的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2001年04期

2 姚忠祥，蔡文琴;體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成與分泌心鈉素的初步觀察[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1995年04期

3 姚忠祥,蔡文琴;應(yīng)用共聚焦激光掃描顯微鏡對體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1998年03期

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本文編號：2831682