【摘要】： 目的 建立紫外輻射損傷人角質(zhì)細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞株)的模型。研究UVB對細(xì)胞周期的進(jìn)程和細(xì)胞凋亡情況，并研究了維生素E(VE)對紫外照射的保護(hù)作用以及相關(guān)基因p53和bc1-2在這些作用下的表達(dá)。方法采用細(xì)胞培養(yǎng)、MTT染色法、流式細(xì)胞技術(shù)、western蛋白免疫印跡法等技術(shù)觀察不同劑量UVB照射下培養(yǎng)不同時(shí)間后的HaCaT細(xì)胞存活率、細(xì)胞周期分布及凋亡的發(fā)生以及加入抗氧化劑后的情況，以及上述情況下p53、bc1-2表達(dá)的變化。結(jié)果 1．UVB劑量不同，培養(yǎng)時(shí)間相同時(shí)，隨劑量增加，存活率逐漸減少；照射劑量相同，培養(yǎng)時(shí)間不同時(shí)，隨時(shí)間延長，細(xì)胞存活率下降到最低值后有恢復(fù)(照射15min除外)。2．細(xì)胞周期結(jié)果分析表明：小于5min的UVB照射劑量，隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長，細(xì)胞增殖指數(shù)：{(S+G2)／(G1+S+G2)}不斷提高；大于或等于5min的照射劑量，隨培養(yǎng)時(shí)間延長細(xì)胞增殖指數(shù)逐漸減少。UVB以時(shí)間劑量依賴方式抑制HaCaT細(xì)胞增殖能力。3．無論是從形態(tài)學(xué)還是流式細(xì)胞圖我們發(fā)現(xiàn)HaCaT細(xì)胞在正常情況下也存在細(xì)胞凋亡。4．隨UVB劑量增加，培養(yǎng)時(shí)間相同時(shí)，凋亡率逐漸增加；照射劑量相同，隨培養(yǎng)時(shí)間延長，凋亡率也逐漸增加。5．VE對UVB照射所致的HaCaT細(xì)胞生長抑制有保護(hù)作用，40μg／ml為VE最佳劑量并且予照射前和照射前后加入保護(hù)作用更佳。6．加入VE后對UVB照射后的PI值明顯升高，細(xì)胞凋亡率降低了約50％。7．UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞中p53和p-p53(Ser15)的表達(dá)增強(qiáng)，p53在照射后12h達(dá)峰值；p-p53的表達(dá)維持12h。bc1-2表達(dá)顯著降低，照射后24h內(nèi)都維持較低水平。8．VE的加入使UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞中p53基因表達(dá)下降，檢測不到p-p53(Ser15)的表達(dá)。而bc1-2表達(dá)量增加，隨培養(yǎng)時(shí)間延長bc1-2逐漸下降。結(jié)論UVB在一定的照射劑量和培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)抑制人角質(zhì)細(xì)胞的生長。UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞發(fā)生G1期為主的細(xì)胞周期阻滯以及細(xì)胞凋亡。VE對此有拮抗作用。p53、p-p53(Ser15)和bc1-2的基因表達(dá)在UVB誘導(dǎo)的損傷反應(yīng)中起一定作用。bc1-2參與了VE對UVB的損傷保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R363

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本文編號：2823577