背景：干細(xì)胞移植在心臟疾病治療中的應(yīng)用日漸顯示出巨大的前景，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)由于具有易獲、易擴(kuò)增的優(yōu)越性，成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。對(duì)MSCs的了解仍存在較多不可知之處，但由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中取得的令人鼓舞的成果，目前已進(jìn)入臨床試驗(yàn)，這就更需要基礎(chǔ)研究的支持，從而使運(yùn)用更安全、更有效和可控。在對(duì)MSCs移植能改善心功能的機(jī)理研究中，對(duì)MSCs是否能在宿主心肌內(nèi)分化成具有主動(dòng)收縮功能的細(xì)胞則存在較大爭(zhēng)議，因?yàn)闊o法直接在宿主心肌內(nèi)觀察移植細(xì)胞的收縮。而就現(xiàn)階段的技術(shù)水平而言，只有從側(cè)面來間接說明這一點(diǎn)，即觀察移植入心肌環(huán)境中的MSCs分化成的細(xì)胞是否具有收縮功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，以及宿主心肌環(huán)境中是否存在能促進(jìn)這種分化的必要條件。 目的：在建立正常心肌細(xì)胞及心肌組織的肌小節(jié)表達(dá)模型基礎(chǔ)上，將MSCs移植入正常心肌組織中，觀察MSCs在宿主心肌內(nèi)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化；并在體外模擬此過程，觀測(cè)心肌微環(huán)境的促分化作用，探討宿主心肌誘導(dǎo)MSCs定向分化的條件及初步機(jī)制。 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 材料和方法: 1.選用健康成年Wistar大鼠心肌組織冰凍切片及新生鼠心肌細(xì) 胞，熒光免疫檢測(cè)thin、MHC、Cx43的表達(dá)情況，以titin的兩個(gè)抗原 部位為橋梁來觀測(cè)肌小節(jié)的形態(tài)。 2.采用BrdU及DAPI雙標(biāo)記MSCs后植入正常Wistar大鼠左室 下壁心肌內(nèi)，術(shù)后存活的動(dòng)物按時(shí)間段隨機(jī)分為:即刻組、1周、2周、 4周、6周、8周、10周、12周組(n=3一4)，按各組所示時(shí)間段取出心 臟，冰凍切片，l正染色及免疫熒光結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)titinZ 帶部分、A帶(M線)部分、MHC及Cx43的表達(dá)，同時(shí)觀察注射后 宿主心肌的變化情況。 3.將新生鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液制成條件培養(yǎng)基，作用于MSCs; 或?qū)⑿律笮募〖?xì)胞與標(biāo)記MSCs共同培養(yǎng)1周，免疫熒光檢測(cè)上述 蛋白質(zhì)的表達(dá)情況，觀察不同的環(huán)境因素對(duì)MSCs分化的影響。 結(jié)果: 1.使用titin作為檢測(cè)標(biāo)志顯示正常心肌組織及新生鼠心肌細(xì)胞， 可以觀測(cè)到規(guī)則組裝的肌小節(jié)的Z帶和M線部分。心肌細(xì)胞之間形成 Cx43表達(dá)的帶狀結(jié)構(gòu)。 2.MSCs植入正常心肌組織后能存活至12周，部分移植細(xì)胞表達(dá) titin，且與宿主心肌細(xì)胞相鄰的細(xì)胞表達(dá)titin組裝程度更高，隨時(shí)間延 長(zhǎng)表達(dá)逐漸明顯，其后進(jìn)入平臺(tái)期，但細(xì)胞體積及胞漿發(fā)育均不及正 常心肌細(xì)胞;在移植細(xì)胞與宿主細(xì)胞之間可檢測(cè)到Cx43的表達(dá)。 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 3.移植細(xì)胞被纖維組織包裹，部分植入細(xì)胞分化為纖維樣細(xì)胞; 可見移植區(qū)域血管的形成;宿主心肌細(xì)胞局部結(jié)構(gòu)稍紊亂，未發(fā)現(xiàn)排 斥反應(yīng)的證據(jù)。 4.正常MSCs中部分細(xì)胞可表達(dá)少量Cx43以及titin;條件培養(yǎng)基 和混合培養(yǎng)均可促進(jìn)MSCs的心肌樣分化，但后者使分化程度更高; 混合培養(yǎng)條件下，MSCs可和心肌細(xì)胞之間形成縫隙連接。 結(jié)論: 1.MSCs可以在正常心肌組織內(nèi)存活并定向分化，但分化程度不 高，尚未具備收縮的完整結(jié)構(gòu)基礎(chǔ); 2.與心肌細(xì)胞形成縫隙連接是實(shí)現(xiàn)MSCs高分化的重要條件。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2811696