N-甲基-D-門冬氨酸受體(NMDAR,NR)的過度激活與腦血管疾病、腦外傷、腦腫瘤及其繼發(fā)的腦內(nèi)綜合征(如腦心綜合征、消化道出血等)、焦慮、抑郁、疼痛、癲癇、癡呆等重大神經(jīng)、精神疾患密切相關。如果能及時、有效地選擇性干預局部受累腦區(qū)NR過度激活所介導的神經(jīng)興奮毒性,將為上述疾患提供有效的防治手段。但已有的NR干預藥物因嚴重的毒副作用和難以適時使用而不能進入臨床,興奮毒性腦損害防治策略研究急需取得新的突破。安全、有效的保護性疫苗接種和抗體治療在該領域是一種新的探索。本實驗主要針對人NR主亞基NR1a膜蛋白M3-M4環(huán)B細胞表位(NE1)的八分枝抗原肽(multiple antigen peptides, MAPsNR1a)的免疫接種途徑進行比較研究,并以MAPsNR1a為篩選抗原淘篩人源性噬菌體抗體庫,為興奮毒性腦損害疫苗免疫防治策略的建立提供實驗基礎。主要實驗內(nèi)容如下: 一. MAPsNR1a的設計、合成和小鼠免疫接種途徑研究 本實驗組已得到人NR1a膜蛋白M3-M4環(huán)上一個B表位NE1,固相合成法合成MAPsNR1a,并以MAPsNR1a為免疫原對小鼠進行鼻腔、腹腔、皮下等多途徑免疫接種并檢測MAPsNR1a特異性抗體;對小鼠進行多指標行為學觀察、水迷宮、避暗、跳臺等實驗及鼻粘膜HE染色,評估MAPsNR1a免疫的安全性和有效性。 結果提示,皮下和腹腔免疫接種均檢測到MAPsNR1a特異性抗體,且對小鼠的行為、學習記憶能力沒有影響,此兩種途徑安全、有效,可以作為MAPsNR1a抗興奮毒性腦保護疫苗的接種途徑;鼻腔免疫接種未檢測到相應抗體,但鑒于其應用簡便等優(yōu)點,可通過佐劑交聯(lián)、改變MAPsNR1a的溶解狀態(tài)等方法進行進一 WP=5 步研究。 二. NE1特異性人源性單鏈抗體噬菌體的篩選和鑒定 NE1單克隆抗體具有抗興奮毒性保護效應,如果能大量制備NE1單克隆抗體,對患病人群在有發(fā)病征兆或發(fā)病早期即給予保護性抗體,不失為一種可行、有效的保護措施。但單克隆抗體不僅制備成本昂貴,而且多為鼠源性,其Fc段是引起人體排異反應的主要部分,即使人源化也會介導抗體依賴的補體激活效應。噬菌體抗體庫技術用細菌克隆取代B細胞克隆表達抗體,不經(jīng)細胞融合,甚至不經(jīng)免疫,制備針對任何抗原的抗體分子,在生物技術領域中,尤其是人源性特異抗體的篩選和制備上獨具優(yōu)勢。該技術自90年代初出現(xiàn)以來, 在多種疾病的診斷、治療及機制研究中顯示出巨大的潛能和廣闊的應用前景。本實驗利用親和富集篩選的辦法,以MAPsNR1a為篩選抗原淘篩人源性噬菌體重鏈抗體庫和輕鏈抗體庫,各獲得一個有較高結合活性的陽性克隆。通過基因重組,將重鏈可變區(qū)基因(VH)克隆入輕鏈噬菌體載體中,獲得了MAPsNR1a特異性單鏈抗體噬菌體克隆。初步鑒定顯示其與MAPsNR1a有高度結合活性,為下一步MAPsNR1a特異性抗體的生物學功能研究及制備提供了基礎。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R392.1

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本文編號：2810281