本文關(guān)鍵詞：MT01對人成骨樣細胞MG63表達TLR7和TLR9的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Toll樣受體(Toll like receptors,TLRs)是一種模式識別受體,早期研究發(fā)現(xiàn)主要表達于免疫細胞上,近來研究發(fā)現(xiàn)成骨相關(guān)細胞內(nèi)也有TLRs的表達,且有研究表明TLRs可調(diào)控骨改建過程中成骨細胞的成骨分化。其中TLR7、9的激活可以上調(diào)白細胞介素1(Interleukin,IL-1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表達,進而活化破骨細胞,促進骨吸收,抑制骨形成。MT01(5'-ACCCCCTCTACCCCCTCTACCCCCTCT-3')是一種根據(jù)人線粒體DNA序列設(shè)計并人工合成的單鏈DNA,是一種免疫抑制性寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)。本課題組前期實驗已證實,MT01可以促進成骨細胞的成骨分化、抑制大鼠牙周炎導致的牙槽骨吸收,通過減少免疫細胞內(nèi)炎性因子的釋放,抑制TLR7、9介導的免疫反應(yīng)。但在此過程中TLR7、9自身的表達量是否也被抑制目前尚不清楚。在前期研究的基礎(chǔ)上本研究擬通過檢測人源性成骨樣細胞系MG63(簡稱MG63)內(nèi)TLRs的表達,進一步從基因及蛋白水平上探討MT01對成骨細胞內(nèi)TLR7、9表達的影響。實驗目的:通過分子生物學方法檢測MT01作用后,MG63內(nèi)TLR7、9 m RNA及蛋白的表達,初步探討MT01對TLR7、9 m RNA及蛋白表達的影響,為進一步研究MT01調(diào)控骨改建的免疫學機制奠定基礎(chǔ)。實驗方法:首先采用普通PCR法篩查MG63內(nèi)TLR1-10 m RNA的表達情況。然后通過Real time PCR法檢測MT01作用于MG63細胞12h、24h和48h后,細胞內(nèi)TLR7、9 m RNA的表達;細胞免疫熒光染色法和Western Blot法檢測細胞內(nèi)TLR7、9蛋白的表達。檢測結(jié)果采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件,應(yīng)用單因素方差進行統(tǒng)計學分析,P0.05為具有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果:普通PCR法篩查MG63內(nèi)TLR1-10 m RNA的表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn)MG63細胞表達TLR1-10 m RNA,其中TLR2、5和10 m RNA呈低表達,TLR1、3、4、6、7、8和9 m RNA呈高表達。通過采用Real time PCR法、細胞免疫熒光染色法和Western Blot法檢測結(jié)果顯示,MT01作用于細胞后,對細胞內(nèi)TLR7、9 m RNA及蛋白表達有顯著的抑制作用,且這種抑制作用沒有明顯的時間依賴性。12h和24h組中的TLR7 m RNA及蛋白的表達量顯著減少,與對照組比有顯著統(tǒng)計學差異;48h組中的TLR7 m RNA及蛋白的表達量與前兩組相比略微增高,但仍低于對照組,且與對照組相比有統(tǒng)計學差異。12h、24h和48h組中的TLR9 m RNA及蛋白表達量均低于對照組,與對照組相比有統(tǒng)計學差異。結(jié)論:(1)人成骨樣細胞MG63有TLR1-10 m RNA的表達,其中TLR2、5和10 m RNA呈低表達;TLR1、3、4、6、7、8和9的m RNA呈高表達。(2)MT01能抑制人成骨樣細胞MG63內(nèi)TLR7、9 m RNA與蛋白的表達。
【關(guān)鍵詞】：MT01 人成骨樣細胞MG63 Toll樣受體 骨改建
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 第1章 緒論12-27
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 文獻綜述13-26
• 1.2.1 TLRs家族概述13-17
• 1.2.2 TLRs與骨改建17-19
• 1.2.3 ODN概述19-24
• 1.2.4 ODN與骨改建24-26
• 1.3 研究思路26-27
• 第2章 實驗材料和方法27-32
• 2.1 實驗材料和試劑27-28
• 2.2 方法和步驟28-31
• 2.2.1 MG63的體外培養(yǎng)28
• 2.2.2 MG63最佳鋪板濃度的確定28-29
• 2.2.3 普通PCR法檢測MG63內(nèi)TLR1-10 mRNA的表達29-30
• 2.2.4 Real time PCR法檢測MT01作用后MG63內(nèi)TLR7、mRNA的表達30
• 2.2.5 細胞免疫熒光染色觀察MT01作用后MG63內(nèi)TLR7、9蛋白的表達30-31
• 2.2.6 Western Blot法檢測MT01作用后MG63內(nèi)TLR7, 9 蛋白的表達31
• 2.3 數(shù)據(jù)分析和圖像整理31-32
• 第3章 結(jié)果32-38
• 3.1 MG63的形態(tài)學觀察32
• 3.2 MG63最佳鋪板濃度32-33
• 3.3 MG63內(nèi)TLRs mRNA表達33
• 3.4 MT01在不同時間點對TLR7、9 mRNA表達的影響33-34
• 3.5 MT01在不同時間點對TLR7、9 蛋白表達的影響34-38
• 第4章 討論38-44
• 第5章 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-53
• 作者簡介及在學期間取得的科研成果53-54
• 致謝54-55

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