【圖文】：

1條為3 015 bp的PGEM-Teasy克隆載體,另1條為600~700 bp之間的γ2鏈Ⅳ功能區(qū)基因;與空克隆載體對(duì)照重組質(zhì)粒PCR反應(yīng)得到1條600 bp左右條帶(圖1)。測序結(jié)果證實(shí),得到的是含長647 bp LN-5γ2鏈IV功能區(qū)基因克隆載體。1:克隆載體PCR產(chǎn)物; 2:空PGEM-TeasyPCR; 3:DNA標(biāo)準(zhǔn)帶DL1500;4:重組質(zhì)粒EcoRI/BamHI雙酶切; 5:λHindIIIDNA標(biāo)準(zhǔn)帶/DNA標(biāo)準(zhǔn)帶DL1500圖1　克隆載體雙酶切鑒定、PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖3.重組表達(dá)載體及表達(dá)蛋白鑒定:通過重組pBV220及PBV220EcoRI/BamHI雙酶切鑒定,重組pBV220被切為2條DNA條帶,3660 bp 1條帶為pBV220載體,600~700 bp間的條帶為γ2鏈IV功能區(qū)基因;而空pBV220僅1條DNA帶(圖2),證實(shí)構(gòu)建出重組表達(dá)載體。含PBV220表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α誘導(dǎo)后,經(jīng)聚丙烯凝膠電泳和凝膠成像系統(tǒng)分析(圖3),發(fā)現(xiàn)1條分子量26 000

表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α誘導(dǎo)后,經(jīng)聚丙烯凝膠電泳和凝膠成像系統(tǒng)分析(圖3),發(fā)現(xiàn)1條分子量26 000,占菌體總蛋白60%的表達(dá)蛋白(圖4),且與含γ2鏈Ⅳ功能區(qū)蛋白分子量一致。三、討論在本試驗(yàn)中,當(dāng)原代細(xì)胞培養(yǎng)至細(xì)胞融合時(shí),提取RNA質(zhì)量較高。這可能與分離消化表皮時(shí),酶對(duì)細(xì)胞的損傷或分離時(shí)間過長,RNA被降解有關(guān)。研究選用pBV220載體可用于多種外源基因的表達(dá),其表達(dá)量占菌體總蛋白60%~80%。另外,外源基因ATG與SD序列之間的合適距離一般為4~10個(gè)核苷酸即可

【共引文獻(xiàn)】

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4 陳傳德,吳中亮,陳家X;乙酸鎳誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞系轉(zhuǎn)化細(xì)胞基因組不穩(wěn)定性分析[J];癌變.畸變.突變;2005年01期

5 熊小芳,黃天華,謝慶東,王曉梅,陳桂蘭;精子攜帶的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的復(fù)制與表達(dá)[J];癌變.畸變.突變;2005年03期

6 呂慧貞;張建朋;陳新;劉靜;張?jiān)?;一種改進(jìn)的鴨梨總RNA提取方法[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年05期

7 張秀華;王文鋒;;微衛(wèi)星DNA聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染技術(shù)的探討[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年06期

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9 倪大虎,向太和,張盤娣,吳家道,楊劍波,賈士榮,余增亮;應(yīng)用低能離子束將抗菌肽ShivaA基因?qū)牖謴?fù)系明恢63的研究(簡報(bào))[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2000年04期

10 許曉風(fēng),郁鋒,楊啟銀,陳育如,彭榮淮,賀海生,王程輝;煙草工業(yè)下腳料綜合利用研究(I)——抗菌成分的提取與抑菌效果測定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2003年02期

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2 郭昱嵩;王中鐸;劉楚吾;陳志明;劉筠;;勒氏笛鯛(Lutjanus russellii)線粒體DNA全序列的測定與分析[A];中國海洋學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊）[C];2007年

3 樊繼德;孔慶國;張梅;于喜艷;;子房注射法獲得轉(zhuǎn)基因甜瓜植株[A];中國園藝學(xué)會(huì)第七屆青年學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2006年

4 李俊華;吳少庭;翁亞彪;甘燕;劉洪波;劉茂鈴;張仁利;高世同;黃達(dá)娜;耿藝介;;弓形蟲表面抗原SAG2基因體外擴(kuò)增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表達(dá)[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 李俊華;吳少庭;翁亞彪;甘燕;劉洪波;劉茂鈴;張仁利;高世同;黃達(dá)娜;耿藝介;;弓形蟲致密顆粒蛋白GRA4基因體外擴(kuò)增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表達(dá)[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

6 唐小江;馬爭;黃建勛;黃漢林;李來玉;牛僑;;正己烷引起紅細(xì)胞膜血影蛋白交聯(lián)的研究[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會(huì)第三次全國學(xué)術(shù)會(huì)議、中國毒理學(xué)會(huì)生化與分子毒理專業(yè)委員會(huì)第五屆學(xué)術(shù)交流會(huì)、貴州省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)成立大會(huì)暨首屆學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

7 嚴(yán)家彬;李新輝;吳淑勤;杜合軍;;鱖魚病毒核酸特異片段表達(dá)及高效價(jià)抗體制備[A];可持續(xù)水產(chǎn)養(yǎng)殖——資源、環(huán)境、質(zhì)量——2003水產(chǎn)科技論壇論文集[C];2003年

8 趙曉瑜;柳偉強(qiáng);李曉霞;;蚯蚓抗菌肽40kDa Fetidin基因的原核表達(dá)與復(fù)性[A];2007年全國生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

9 張核子;王保捷;丁酶;肖仰哲;巴穎;李劍平;李春梅;劉利民;賴躍;;短串聯(lián)重復(fù)位點(diǎn)FGA擴(kuò)增片段長度多態(tài)性研究[A];第二次全國法醫(yī)物證學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];1998年

10 胡姣;譚曉風(fēng);張琳;龍洪旭;田曉明;;油茶種子胚乳總RNA提取方法研究及改良[A];第二屆中國林業(yè)學(xué)術(shù)大會(huì)——S9 木本糧油產(chǎn)業(yè)化論文集[C];2009年

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3 陳其華;前癃通膠囊治療良性前列腺增生癥臨床觀察及其對(duì)間質(zhì)細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 馬麗菊;云南宣威肺癌細(xì)胞系側(cè)群細(xì)胞特征分析[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

5 許雷;大青楊纖維素合酶基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

6 朱偉;攝食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1對(duì)機(jī)體胰島素敏感性的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

7 王金鵬;4α糖基轉(zhuǎn)移酶環(huán)化活性定向控制及其大環(huán)糊精產(chǎn)物的分離及應(yīng)用研究[D];江南大學(xué);2011年

8 程光平;巴馬~P唇渻生物學(xué)及遺傳學(xué)研究[D];中國海洋大學(xué);2011年

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6 李靜;父源性HLA-A基因與子癇前期相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2010年

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8 張磊;杜氏鹽藻（Dunaliella salina）GPI多克隆抗體的制備及其在MDCK細(xì)胞中的定位[D];鄭州大學(xué);2010年

9 馮玖玲;杜氏鹽藻RbcS基因家族新成員的克隆及功能研究[D];鄭州大學(xué);2010年

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3 宋來君;;全麻喚醒和術(shù)中功能定位切除腦功能區(qū)病變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

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3 本報(bào)記者 李高超;后奧運(yùn)北京:六大功能區(qū)演繹高端聚集[N];國際商報(bào);2008年

4 記者 張慧敏;北京將試編各功能區(qū)CPI[N];北京商報(bào);2011年

5 ;五大功能區(qū) 構(gòu)建新都現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)體系[N];四川日?qǐng)?bào);2010年

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10 劉穎邋通訊員 何文暉;“六大功能區(qū)”托舉現(xiàn)代服務(wù)業(yè)[N];天津日?qǐng)?bào);2007年

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2 張曉軍;主體功能區(qū)視角下的甘肅公共財(cái)政政策研究[D];財(cái)政部財(cái)政科學(xué)研究所;2012年

3 孫鵬;中國大都市主體功能區(qū)規(guī)劃的理論與實(shí)踐[D];華東師范大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：2792651