【摘要】： 目的：通過對幽門螺桿菌CagA蛋白肽段的基因克隆和表達，確定CagA蛋白中與相應抗體親和力最強的肽段，為制備幽門螺桿菌高毒株感染血清學診斷試劑盒奠定基礎。 方法：根據幽門螺桿菌cagA全基因序列以DNAMAN軟件設計五對引物，采用PCR方法擴增出五條幽門螺桿菌cagA基因片段。采用堿裂解法提取原核表達載體質粒pGEX-3X，并對其進行單酶切。將PCR擴增產物插入至原核表達載體pGEX-3X中，采用氯化鈣轉化法將連接產物轉化至大腸桿菌Top10中，形成五種重組質粒。先通過氨芐平板初步篩選，再采用PCR方法篩選轉化陽性的質粒，最后通過核酸限制性內切酶酶切及測序確定其連接方向。經篩選為陽性的重組質粒以1mMol／L的IPTG誘導表達，預測所表達的CagA蛋白肽段分子大小分別為66KD、29KD、36KD、99KD和63KD，并以包涵體的形式存在。包涵體經8Mol／L尿素初步純化后，運用ELISA方法檢測其抗原性并確定相應抗體親和力最強的CagA蛋白肽段。 結果：五條cagA基因片段在大腸桿菌中都得到了表達，表達的蛋白均具有強弱不等的抗原性，其中66KD的蛋白肽段與抗CagA抗體親和力最強。 結論：66KD的蛋白肽段與抗CagA抗體親和力最強
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【參考文獻】

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1 劉炯,許國銘;幽門螺桿菌cag致病島的研究進展[J];中華消化雜志;1999年06期

本文編號：2760120