【摘要】：乳酸脫氫酶C4(LDH-C4)是一種睪丸特異的乳酸脫氫酶同工酶，它在精子發(fā)生的過程中及精子成熟后始終有部分位于精子的漿膜上，并利用精漿中的乳酸產(chǎn)生能量作為精子的動力。動物實驗證明，針對LDH-C4的抗體具有避孕效果，因此，近20年來，LDH-C4一直是避孕疫苗研究開發(fā)的重要候選對象之一。 我們將小鼠LDH-C亞基全長編碼序列克隆入質(zhì)粒pET-28a，構(gòu)建原核重組表達載體。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(ED3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達后，通過SDS-PAGE、乳酸脫氫酶活性測定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析對表達產(chǎn)物進行了鑒定。結(jié)果顯示我們獲得了大量具有生物活性的可溶性小鼠重組LDH-C4，為下一步大量純化小鼠LDH-C4和動物免疫實驗提供了條件。 我們同時采用帶強力CMV啟動子的pVAX1質(zhì)粒構(gòu)建了小鼠LDH-C4的真核重組表達載體，并轉(zhuǎn)染Hela細胞，進行瞬時表達。通過RT-PCR在mRNA水平上鑒定到外源性LDH-C基因的轉(zhuǎn)錄，通過提取轉(zhuǎn)染細胞總蛋白進行乳酸脫氫酶活性測定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析，鑒定到目的蛋白的表達。這是首次在哺乳動物細胞中表達了小鼠LDH-C4蛋白，為進行避孕基因疫苗的動物實驗奠定了基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R392
【圖文】：

第二軍醫(yī)大學碩士學位論文5.乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳從圖6可以看出，將重組菌裂解后上清中存在的可溶性蛋白LDH一C4，在LDH一3和LDH一4之間有特異性顯色，而各組對照組中均沒有。圖6乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳Figure6.PAGEanalysisoflaetatede勿drogenaseisozymes1空質(zhì)粒誘導(dǎo)前;2空質(zhì)粒誘導(dǎo)后;3重組質(zhì)粒誘導(dǎo)前;4重組質(zhì)粒誘導(dǎo)后;5新鮮人血清:pET一28(a):pET

【參考文獻】

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本文編號：2750438