發(fā)布時間：2020-07-09 13:26

【摘要】： 人胸腺素α原（Human prothymosinα，ProTα）是一個在體內(nèi)分布廣 泛，進化上高度保守的強酸性蛋白質(zhì)，其相對分子量為1.3×10~4，基因定 位于第2號染色體上，目前已有6個亞家族成員被克隆和測序。ProTα作 為免疫調(diào)節(jié)因子具有多種生理功能，國外克隆出高加索人種的ProTα基因， 其表達產(chǎn)物作為抗腫瘤的一種生物制品已進入了臨床驗證階段。 我們從中國人本身克隆出漢族人的ProTα基因，已被美國NCBI GenBank收錄（Accession:AF170294）。新基因長度為300bp，編碼100個氨 基酸，在DNA水平與高加索人的有90％的同源性，推導的氨基酸序列與 國外已克隆的ProTα有86.4％同源性，說明這是一個ProTα的新亞型。我 們在原核系統(tǒng)中成功表達新ProTα基因的融合蛋白，分子量為3.7×10~4。 經(jīng)純化鑒定后，對它的生物學功能作了進一步研究。 以經(jīng)原核系統(tǒng)表達并純化的GST蛋白作對照品，發(fā)現(xiàn)本室融合表達的 ProTα蛋白可明顯刺激人外周血淋巴細胞E—玫瑰花結形成率，最高濃度 的ProTα（10~(-7)mol/L）的刺激率可達52.7％。 ProTα有顯著的促細胞增殖作用。在無ConA作用下，單獨ProTα以 10~(-7)、10~(-8)mol/L濃度明顯刺激小鼠胸腺和脾細胞增殖（p＜0.01）；在與ConA 協(xié)同作用下，10~(-7)mol/L濃度的ProTα能明顯促進胸腺細胞的增殖（p＜0.01）， 大于10~(-10)mol/L濃度的ProTα都能明顯促進脾細胞的增殖（p＜0.01）。不論 有無ConA，ProTα對兩種細胞的促增殖作用有劑量依賴性。 在ProTα影響細胞因子分泌的實驗研究中，發(fā)現(xiàn)ProTα在一定劑量上 可顯著促進具有免疫調(diào)節(jié)活性的細胞因子IL-2和IFN-γ、炎癥介導活性的 TNF-α、抗病毒活性的IFN-α的分泌。無論有無ConA，10~(-7)、10~(-8)mol/L濃 度的ProTα均能促進小鼠胸腺和脾細胞分泌IL-2；10~(-7)mol/L濃度的ProTα 能促進IFN-γ的分泌；ProTα和ConA（5μg/ml）有協(xié)同作用，且均以10~(-7)mol/L 濃度最佳。在LPS（10μg/ml）的誘導下，與對照組相比，10~(-7)mol/L ProTα能 有效地刺激小鼠巨噬細胞分泌TNF-α（p＜0.01）和IFN-α（p＜0.01）。 為了考察在mRNA水平上ProTα對小鼠脾細胞的影響，我們應用MGEC 胸腺素口原的生物學活性及DNA芯片分析研究 一405基因表達譜芯片進行了研究比較，發(fā)現(xiàn) ProT a對七種基因有上調(diào)作 用：蛋白酪氨酸磷酸酶基因p＊＊朋幻＊e＊BmMD：＊24700卜 淋巴細胞抗原 6復合體（D86232X 增殖相關基因A（D21252卜 多功能蛋白水解酶7的大亞 基（X64449卜 核糖體蛋白L6（NMOI 1290廠 鼠6 號染色體BAC一 284H12（AC002397）、鼠E7．5胚胎文庫肌蛋白CDNA（AW536575），等等。這 些基因在與兩種探針雜交時表現(xiàn)出較大的差異，且上下調(diào)趨勢一致，程度 相似。 結果表明，新基因具有顯著的免疫調(diào)節(jié)生物學功能，對許多疾病的治 療有潛在意義，這為我們下一步研究提供了理論基礎。相信經(jīng)過我們的努 力，新的 ProT a蛋白可作為一種新的基因工程藥物應用于臨床。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：Q574;Q78

【參考文獻】

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本文編號：2747520