【摘要】： 目的 為尋找有價(jià)值的血吸蟲(chóng)疫苗候選抗原分子，本課題從候選基因篩選、克隆和表達(dá)及免疫保護(hù)性評(píng)價(jià)方面進(jìn)行了初步探索。 方法 1 用日本血吸蟲(chóng)肝門型童蟲(chóng)表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清篩選日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA文庫(kù)，并對(duì)陽(yáng)性克隆的插入片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序，利用互聯(lián)網(wǎng)對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行同源性比較分析，并預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能；2 將SjCAI基因亞克隆至pCEX-5X-3載體，分別將此重組質(zhì)粒pGEX-SjCAI，以及本室已構(gòu)建的重組質(zhì)粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌ER2566，在IPTG誘導(dǎo)下進(jìn)行表達(dá)，分別將表達(dá)產(chǎn)物免疫小鼠，并觀察免疫保護(hù)效果。 結(jié)果 1 經(jīng)三輪篩選，獲10個(gè)陽(yáng)性克隆，對(duì)其中3個(gè)陽(yáng)性克隆測(cè)序的結(jié)果顯示，1個(gè)與Sj原肌球蛋白基因序列顯著同源，另兩個(gè)為新基因片段，命名SjHm1、SjHm2；2 構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX-SjCAI，在大腸桿菌中高效表達(dá)了融合蛋白SjGST-CAI、SjGST-31b和SjGST-31c，分別將其免疫小鼠，誘導(dǎo)產(chǎn)生了29.87％、22.71％和13.6％的減蟲(chóng)率，減卵率分別為63.74％、54.21％及45.01％。 結(jié)論 1 SjHml、SjHm2編碼蛋白有可能作為血吸蟲(chóng)病疫苗候選抗原分子，其免疫保護(hù)作用有待進(jìn)一步研究；2 rSjGST-31b、rSjGST-31c能誘導(dǎo)部分抗日本血吸蟲(chóng)免疫保護(hù)力，而rSjGST-31b的免疫效果優(yōu)于rSjGST-31c；3 SjCAI基因亞克隆至pGEX-5X-3載體后可在大腸桿菌中高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物rSjGST-CAI具有明顯的抗生殖免疫力和較好的抗尾蚴攻擊感染的保護(hù)性免疫，有望成為血吸蟲(chóng)病疫苗新的候選抗原分子。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

SDS一PAGE顯示rsjGST一CAI融合蛋白的分子量為66kDa(圖3一3)，這與根據(jù)基因序列推算的分子量是一致的。l、

本文編號(hào)：2718855