【摘要】： 睪丸Leydig細胞合成和分泌雄激素，其主要反應途徑是：膽固 醇 膽固醇側鏈裂解酶（P450scc） 孕烯醇酮 3β-羥甾脫氫酶（3βHSD） 孕酮 17α- 羥化酶（P450c17） 17-羥孕酮 P450c17 雄烯二酮 17-羥甾脫氫酶（17βHSD） 睪 酮。在這一過程中，4種睪酮生成酶的作用非常重要，它們的表達量 直接影響到Leydig細胞的睪酮合成量。在機體中，辜酮生成酶的表達 受到多種因素在多個水平的調節(jié)，近年來有研究發(fā)現類固醇生成因子 -1（steroidogenic factor 1，SF-1）也可能調節(jié)睪酮生成酶的表達， 影響睪酮合成。SF-1屬于核受體蛋白，1992年首先由Lala等從牛腎 上腺細胞核提取物及鼠腎上腺細胞核提取物中純化得到。通過對一些 睪酮生成酶基因的序列分析，發(fā)現牛和鼠類P450scc、P450c17基因以 及人Ⅱ型3βHSD基因的5’端轉錄起始點上游均存在SF-1的結合位點， 誘導這些位點突變導致目的基因轉錄水平下降，或使得它們對hCG的 反應性下降，提示SF-1可能和這些睪酮生成酶的轉錄調節(jié)有關，影響 睪酮合成。然而，目前只有資料間接顯示胚胎期SF-1與睪丸雄激素生 成具有相關性，，本研究目的旨在直接闡述青春期SF-1對睪酮生成的調 節(jié)作用。 實驗共分三個部分進行：第一部分探討青春期小鼠睪丸組織是 否有SF-1表達以及它與睪酮生成酶的表達是否具有相關性；第二部分 在證實青春期睪丸SF-1與睪酮生成酶表達具有相關性的基礎上，進一 步檢測SF-1是否在青春期睪丸Leydig細胞有表達，從形態(tài)學方面證 實SF-1對睪酮生成的調節(jié)作用；第三部分在確定SF-1在青春期Leydig 細胞中表達的基礎上，進一步直概研究Leydig細胞中SF-1對睪酮生 成酶表達以及睪酮合成的調節(jié)作用。 南京醫(yī)科大學碩士學位論文 第啼分：青糊小鼠睪丸中SF《與睪酮生成酶InRNA M的相 關性研究 運用半定量盯平CR方法，分別測定了 5天、2 0天和 3 0天。J。鼠睪 丸組織中SF一1及P450scc、P450c17、30HSD、170HSD的mRNA水平， 結果顯示：5天小鼠性腺功能仍未成熟；睪丸中肝＜：RNA水平毗； 2 0 k，1、鼠開kbil？LN青春期發(fā)育，睪丸中辟八 水平馴上升，但 與5天小鼠相大無明顯差異（P＞0．05），與此同時P450SCC mRNA水平 也升高；3 0天小鼠個步發(fā)育成熟，睪丸 SF葉 水平進一步增高， 與 5天，J、鼠相比有顯著差異u北．05）；k匕時P45腫cc mRNA的水平也 達多高峰，與 5天小鼠相比有顯著差異汀刎．05）。提示SF葉與 P45kCC mRNA的水平呈正相關變化。＆ SF－lmRNA水平與 P450c17、36HSD、 17即SD mRNA水平之間朋相關性。這一結肌分子水平間蝴示了 SF葉與青春期睪酮生成之間的相關性，它可能參與調節(jié)P450北c的轉 錄，影響睪酮的合成。 第二部分：青春期小鼠睪丸中SF＜的表達 運用免疫組化的方法，測定了 5天、2 0天和 3 0天，J、鼠睪丸中”＜ 的表達，結果顯示：5天小鼠Leydg細胞屬于未成熟型，分泌的雄激 素水平毗，細觸中未見SF上表達；20天小鼠進入青春期，30天 小鼠進一步發(fā)育成熟，它們的 Leydig細胞馴發(fā)育為成熟型，分雌 激素，f則嫡中耶－1大量表達。由此可見，SFl在Lcydig細胞中的 表達與細胞的功能發(fā)育及激素生成水平相一致，進一步帥態(tài)學方面 證實了 SF＜可能參與調節(jié)青春期睪酮的生成。同時，實鞭顯示：5 天小鼠睪丸曲細精管仍為實。C細胞索，只有A型桶細胞和未成熟型 Sertoli細胞，此時 S咖li細胞中有盯4表達，6 A型精原細胞未見 SF－l表達；20、30 A，J、鼠曲細精管開kb出現管腔，S咖h細胞轉化為 成熟型；SFq表達消失。生精細胞同時帳育分化，開始出現B型精 原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞等各級生精細胞， SF 4在B型舶細帆細線期、偶線期、粗線期初級精母細B嚨中表 達。這一結果揭示了 SF葉在精子發(fā)生腑中順的作用，尤其在 B 2 南京醫(yī)科大學碩士學位論文 型舶細胞向初級精母細胞洲以及初蝴母細胞的第一次成熟分裂 隙中起重抓用，它可能對一些與精子發(fā)生相關的基固姊調節(jié)作 用。 第三部分：青釉小鼠睪丸中的葉對N 5 os CC及 3耶D的調節(jié) 作用 分離青春期小鼠睪丸 LCydig細胞，槽以體內環(huán)境，建立體外培養(yǎng) 細胞的方法，在培養(yǎng)瞇中加入 hCG刺激，測定細胞的睪酮分泌量及 細胞內 P45帖CC和36HSD mRNA水平。結果顯示：在LH／hG作用 下，培養(yǎng)的 Leydig細胞內 P450scc和 VI型鄧HSD mRNA表棚加， 促進睪酮合成，這一結果與體內情況相符合。 在此實驗基礎上，將SF＋的反義躺替酸轉染進入培養(yǎng)的Leydig 細胞，阻斷SF＜蛋白質的表達，測定細胞的睪酮分泌量及細胞內 P450SCC和30HSDtnRN水平。結果顯示：反義SF4＋hCG作用組的 睪酮含量與空白組相比無顯著差異，卻明顯低于正義SF地CG組及 hCG作用組，提示比G對睪SNob＆．的刺郵用翩于辟l的存在，
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R339.21

【引證文獻】

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1 曲銀娥;COXⅦa在中老年男子部分雄激素缺乏綜合征中的作用及機理研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

本文編號：2698653