發(fā)布時(shí)間：2020-06-02 11:35

【摘要】： 目的 人乳頭瘤病毒為廣泛感染人類皮膚、生殖道、呼吸道等上皮組織的無(wú)囊膜小DNA病毒，至今已發(fā)現(xiàn)有100多個(gè)型別，而HPV16型是我國(guó)婦女宮頸癌感染的主要型別。表達(dá)人乳頭瘤病毒16(HPV16)晚期基因L1，為HPV感染的檢測(cè)、診斷和治療奠定基礎(chǔ)。 方法 收集宮頸癌組織標(biāo)本，設(shè)計(jì)一對(duì)L1基因特異引物，用PCR方法從宮頸癌組織中獲得L1基因部分片段，構(gòu)建入克隆載體pGEM-T，雙向測(cè)定插入片段序列并進(jìn)行序列分析；亞克隆入pBV220載體，經(jīng)酶切鑒定后進(jìn)行溫度誘導(dǎo)表達(dá)，所得蛋白再行Western-Blot和ELISA鑒定。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明成功將L1基因克隆入非融合表達(dá)載體，在55kD處出現(xiàn)了L1重組表達(dá)的蛋白條帶，經(jīng)ELISA和Western Blot分析，表達(dá)的L1蛋白均具有良好的抗原性。 結(jié)論 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)所得到的HPV16 L1 DNA序列與國(guó)內(nèi)報(bào)道4處堿基變化又有所不同。即原始序列5892處的C變?yōu)門；6337處的核苷酸C變?yōu)門；6423處的核苷酸A變?yōu)镚；6799處的核苷酸T變?yōu)镃。說(shuō)明各地區(qū)的宮頸癌組織中所獲HPV16L1基因有所差異，在針對(duì)各地區(qū)的HPV感染檢測(cè)時(shí)，應(yīng)考慮地區(qū)因素。重組表達(dá)蛋白進(jìn)行Western-blot分析和ELISA雜交鑒定證實(shí)表達(dá)的L1蛋白能與商品化的乳頭瘤病毒抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，提示其可能用于檢測(cè)HPV感染者的抗體。使今后開發(fā)出通用、特異、低成本的HPV診斷試劑成為可能，并為基因疫苗的進(jìn)一步研究提供了有力的依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2693095