【摘要】：炭疽芽孢桿菌是重要的病原微生物，并可引起嚴(yán)重的吸入性炭疽病。炭疽桿菌A16R是由炭疽桿菌A16演化而來(lái)的減毒疫苗株。 BAC系統(tǒng)的發(fā)展為我們將其用于基因組研究提供了條件，由于BAC能夠構(gòu)建大片段的基因組文庫(kù)，并且具有穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，目前已經(jīng)成為基因組學(xué)研究的首選工具。為此我們構(gòu)建了基于BAC系統(tǒng)的炭疽桿菌A16R基因組文庫(kù)。 該文庫(kù)以plindigoBAC-5為載體，，包含從大于15000個(gè)重組克隆中隨機(jī)挑選出的9600個(gè)克隆，平均插入片段為56kbp，基因組覆蓋率約為12倍。通過(guò)對(duì)隨機(jī)挑選的700個(gè)克隆進(jìn)行末端測(cè)序，測(cè)序結(jié)果應(yīng)用NCBI的BLASTN系統(tǒng)與炭疽桿菌Ames株和蠟樣桿菌ATCC 14579基因組進(jìn)行了比對(duì)，大部分序列比對(duì)結(jié)果顯示了高度的一致性，并可以作為序列標(biāo)簽位點(diǎn)。為了構(gòu)建基因組物理圖譜，我們應(yīng)用Excel軟件對(duì)序列標(biāo)簽位點(diǎn)進(jìn)行了排序；對(duì)于物理圖譜中的空缺部分，用PCR步行的方法進(jìn)行了填補(bǔ)；用artemis-V4軟件繪制了以序列標(biāo)簽位點(diǎn)為基礎(chǔ)的基因組物理圖譜，該炭疽桿菌A16R的基因組物理圖譜覆蓋率為93％。 炭疽桿菌A16R基因組BAC文庫(kù)被證明是構(gòu)建其基因組物理圖譜的有力工具，通過(guò)其基因組物理圖譜，我們不僅能夠?qū)ζ浠蚪M的特定區(qū)域進(jìn)行直接測(cè)序，而且我們還可以很方便地應(yīng)用這些克隆直接迅速地進(jìn)行功能基因組學(xué)研究。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R346

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 翁琴云;稻瘟菌FJ95054B菌株無(wú)毒基因的遺傳分析及其BAC文庫(kù)的構(gòu)建[D];福建農(nóng)林大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2691854