【摘要】：睪丸的精子發(fā)生是一個獨特復雜的細胞分裂分化過程。睪丸生精小管中的生精細胞先后經過三個階段的變化:精原細胞的增殖,精母細胞的減數(shù)分裂和精子細胞的變態(tài)過程,最終產生成熟的精子。在這一系列的形態(tài)學和生物學功能變化的背后是錯綜復雜的基因網絡調控的過程。 睪丸內復雜的基因表達調控一直是人們關注的熱點,研究發(fā)現(xiàn)選擇性剪接是在睪丸內轉錄水平控制基因表達的一種重要機制,對睪丸組織中的選擇性剪接的深入研究有助于理解其基因表達調控的機制和蛋白的多樣性。 本研究在用睪丸cDNA芯片與成人、6月齡胚胎睪丸及精子cDNA探針雜交的基礎上,鑒定了一條在人睪丸中表達的NORPEG基因(新的視網膜色素上皮細胞基因)的新轉錄本。因其比NORPEG短,因此命名為sNORPEG。此cDNA序列被輸入到Genbank,登錄號為AY317139�；蚪M比對顯示,sNORPEG基因定位于5p13.2-13.3。sNORPEG的cDNA全長3486bp,開放閱讀框長2952bp,編碼大小為110.4KDa的蛋白質。氨基酸序列分析顯示其含有六個錨蛋白重復序列和兩個卷曲螺旋結構域,與人NORPEG蛋白及小鼠ankycorbin蛋白高度同源。研究表明NORPEG蛋白是一個和細胞骨架功能相關的蛋白,分布在視網膜色素上皮細胞胞質,研究發(fā)現(xiàn)小鼠ankycorbin蛋白分布在細胞與細胞之間粘著的部位,與細胞周邊終末網的肌動蛋白絲結構相互關聯(lián),是一種與肌動蛋白功能相關的蛋白。RT-PCR實驗結果顯示sNORPEG在胚胎、成人睪丸和精子中均有表達,也在人多種組織中廣泛表達。 綜上所述,sNORPEG是一條NORPEG基因的新轉錄本,在睪丸
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結果.1芯片雜交在成人和胚胎。DNA探針與爭丸芯片雜交實驗基礎上，我們分離鑒了一個新的在胚胎和成人有差異表達的克隆。它在胚胎和成人爭丸的雜交信號值分別為9.88和30.90，成人爭丸中的信號強度比胚胎的高3.12倍(圖3)。此外，它在精子中的雜交信號值為15.54，這明該基因在生精細胞中有表達。這是一條NORPEG基因短的不同轉本，因此命名為sNORPEG。

1.3sNORpEG的臟器表達特異性Rl二PCR結果顯示SNORPEG在胚胎爭丸，成人爭丸及精子中均有表達(圖8)。也在人多種組織中廣泛表達，在心，腦，胎盤，肺，肝，’腎，胰腺，脾，胸腺，辛丸，，卵巢，小腸，，結腸中都有表達，在骨骼肌有極微弱的表達，在前列腺，外周血白細胞未見表達，其中在肺和肇丸組織中檢測到一條未知的片段，新片段經AT克隆測序后證實其為這條基因的一條新的EST(圖9)。這條新的EST提交到NCBIEST數(shù)據(jù)庫，其ESTid號為21253188。(圖10)。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

【參考文獻】

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1 ;Expression of a novel bHLH-Zip gene in human testis[J];Asian Journal of Andrology;2003年02期

本文編號：2688497