【摘要】：本文通過高效液相離子交換色譜(HPIELC)和激光光散射儀聯(lián)用的分離－檢測系統(tǒng)研究腸致瀉性大腸桿菌的色譜行為，旨在發(fā)展一種能適用于臨床診斷和流行病學調(diào)查的快速分離、檢測和鑒定致病菌的新方法。 文中首先對色譜條件進行了優(yōu)化，確定對腸致瀉性大腸桿菌表征的最佳色譜條件和檢測方法。在此條件下，腸致病性大腸桿菌(EPEC)和腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)有其各自的特征性圖譜：EPEC的各主要血清型菌種(除E.coli O125:H-外)均表現(xiàn)為一個穿透峰和一個洗脫單峰、洗脫峰保留時間介于16min－19min；EIEC的各主要血清型菌種均只表現(xiàn)為一個尖銳而對稱的洗脫峰，色譜保留時間介于22min－25min。 接著從兩個方面探討了造成EPEC和EIEC色譜行為不同的原因。1.通過靜態(tài)、動態(tài)的吸附實驗，比較了離子交換樹脂對EPEC和EIEC的吸附容量，排除了EPEC的穿透峰是由樹脂對細菌吸附過飽和引起的可能性；收集EPEC穿透峰、洗脫峰的菌樣進行顯微鏡鏡檢、菌峰再培養(yǎng)后的重色譜表征、生化藥敏實驗、透射電子顯微鏡觀察、去除菌體鞭毛后的色譜表征等實驗證實了EPEC的穿透峰是由鞭毛引起的。2.通過對EPEC、EIEC菌體的全細胞脂多糖SDS-PAGE電泳分析和測定EIEC、去除鞭毛后EPEC的疏水性實驗表明：EPEC和EIEC洗脫峰保留時間的差異是由脂多糖通過影響菌體與樹脂間的靜電作用和疏水作用造成的。 對各種不具有鞭毛的志賀氏菌進行色譜表征，均未發(fā)現(xiàn)穿透峰。這進一步驗證了穿透峰是由鞭毛引起的。同時志賀氏菌缺失O－多糖鏈后保留時間延長，其中宋內(nèi)氏志賀氏菌遲5min左右、福氏志賀氏菌2a型遲3min左右，進一步表明脂多糖是影響細菌色譜行為的關(guān)鍵因素。 將10株經(jīng)生化、血清學試驗鑒定均為O157大腸桿菌的菌株進行色譜表征，與標準株的色譜圖對照，發(fā)現(xiàn)其中編號為PC029和NS283的菌株表現(xiàn)出異常的色譜行為。經(jīng)PCR驗證，結(jié)果表明這兩株并非O157大腸桿菌。 實驗表明，EPEC、EIEC、E.coli O157:H7、志賀氏菌有其各自的色譜特征圖譜，鑒于此，本研究成功地分離了EPEC和EIEC的混合樣品以及EIEC和志賀氏菌的混合樣品。 以上結(jié)果表明，HPIELC可作為“指紋圖譜”應用于細菌的分類鑒定、分離純化，而且為判斷細菌動力、抗原變異提供一種快速、靈敏、適用的新手段。
【圖文】：

圖 1-1 FCM 主要原理示意圖胞術(shù)的主要原理如圖 1-1 所示。簡要的說，即制備合中的細胞以很高的流速通過光照區(qū)，其產(chǎn)生的光學或接受，并測得細胞或亞細胞成分的重要生物學性質(zhì)，的信號被定量分析[8-9]。胞術(shù)與其它細胞分析技術(shù)相比具有如下特點：1.高速5000 個細胞；2.高靈敏度，每個細胞只要帶有 1000～出，兩個細胞之間有 5％的差別就可區(qū)別出來，光散精度，在細胞懸液中測量細胞，比其它分析技術(shù)的變；4.高純度，分選細胞的純度可達 99％以上；5.多參定量檢測 DNA、RNA 等多個參量；6.在適當?shù)臈l件下，分析和分選。代初期，，F(xiàn)CM 在動物細胞的應用研究發(fā)展迅速，但礙在微生物學領域取得進展。直到 1979 年，Steen 小組

遞鏈后的細菌進行了表征。2000 年以來，以 Arm把高效毛細管電泳引入到微生物分離的應用領域的病原菌，快速分析消費商品中的微生物組成以活率[33-34]。這些研究都表明，對于細菌的研究毛效的分析手段，也進一步說明了不同微生物在表泳法的分離模式有限，不能根據(jù)細菌細胞的多種更重要的是毛細管電泳法難以篩選和回收用于進的細菌活細胞。離技術(shù)化性是細菌對化學物質(zhì)的反應，具有這種趨化性度下得到分離，然而對于運動型非趨化性細菌的(Field-flow fractionation，F(xiàn)FF)可有效解決這
【學位授予單位】：福州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R378

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本文編號：2683066