【摘要】：目的：以人皮膚成纖維細(xì)胞作為靶細(xì)胞，了解人皮膚成纖維細(xì)胞和細(xì)胞因子在登革病毒原位組織感染和致病中的作用，為探討登革病毒感染的發(fā)病機(jī)理并指導(dǎo)臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)的第一部分采用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化培養(yǎng)法培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，選擇合適的條件進(jìn)行體外培養(yǎng)并用免疫組織化學(xué)法鑒定：第二部分用DV_2感染HSF后，在不同時(shí)間(4h、8h、24h、48h、72h、96h)收集感染上清，用甲基纖維素微量病毒空斑法測(cè)定病毒滴度(pfu／ml)，用間接免疫熒光法觀察登革病毒抗原陽性細(xì)胞，在透射電鏡下找病毒顆粒；第三部分中分別用高、中、低濃度的IL-6、TNF-α、GM-CSF單獨(dú)作用于DV_2感染HSF的不同環(huán)節(jié)(病毒吸附時(shí)和病毒吸附后)于感染后的不同時(shí)間(24h、48h、72h、96h)收集感染上清，測(cè)病毒滴度(pfu／ml)；第四部分將HSF接種于24孔板中，DV_2吸附2h后，于感染后不同時(shí)間(6h、24h、36h、48h、72h)收集感染上清，，同時(shí)做陰性對(duì)照，用ELISA法定量測(cè)定IL-6、TNF-α的含量。 結(jié)果：1．用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化在體外可成功培養(yǎng)出人皮膚成纖維細(xì)胞，消化的皮膚成纖維細(xì)胞接種24h內(nèi)貼壁，免疫組織化學(xué)法顯示為成纖維細(xì)胞。2．病毒感染后12h即可在培養(yǎng)上清中測(cè)出病毒，病毒滴度48h達(dá)到高峰，以后下降。用間接免疫熒光法檢測(cè)登革病毒抗原陽性細(xì)胞，以48h熒光陽性細(xì)胞多，胞漿內(nèi)出現(xiàn)很強(qiáng)的熒光。在光鏡和電鏡下，感染細(xì)胞均未見明顯的形態(tài)和結(jié)構(gòu)改變，電鏡下在感染細(xì)胞胞漿里找到具有致密核心的可疑病毒顆粒。3．登革病毒感染能引起成纖維細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的水平明顯增高。4．在病毒吸附時(shí)中濃度的IL-6能顯著提高病毒產(chǎn)量；在病毒吸附時(shí)和病毒吸附后高濃度的TNF-α能抑制病毒的產(chǎn)量。 結(jié)論：登革病毒在體外能穩(wěn)定地感染人皮膚成纖維細(xì)胞表明成纖維細(xì)胞很可能是蚊叮咬后在原位組織中首先支持登革病毒感染的細(xì)胞之一；細(xì)胞因子在登革病毒感染人皮膚成纖維細(xì)胞的致病和免疫過程中起重要作用。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R373

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2681373