發(fā)布時間：2020-05-26 00:27

【摘要】：目的 制備金黃色葡萄球菌B型腸毒素(staphylococcus aureusenterotoxin B, SEB)的單克隆抗體(Monoclonal antibody, McAb)，建立檢測金葡菌B型腸毒素的ELISA檢測方法，并進行初步的臨床應(yīng)用。 方法 以天然純化的SEB免疫BALB／C小鼠，采用細胞雜交瘤技術(shù)，篩選出抗SEB的McAb，在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA方法，用標準菌株和臨床分離株進行評價，并初步應(yīng)用于燒傷病人血清中SEB的檢測。 結(jié)果 制備了抗SEB-McAb共六株，其中1C_8、1A_5、1D_1、3D_6分泌的McAb類型為Ig G1，2C_(11)、3A_9分泌的McAb類型為Ig G2a。6株中有4株僅與SEB發(fā)生反應(yīng)，有兩株與SEC_1有弱交叉反應(yīng)，與大腸埃希菌、糞腸球菌、綠膿假單胞菌、腐生葡萄球菌均不發(fā)生反應(yīng)。同時制備了抗SEB多克隆抗體1株。SEB-McAb誘導(dǎo)小鼠腹水純化后效價為1：12800-1：25600，抗體親和力常數(shù)為5×10~7～2×10~9。Western-blot實驗顯示出一條特異性條帶，位于分子量28.5KDa處，證明了其特異性。用特異McAb建立了雙抗體夾心ELISA法檢測SEB，其敏感性高，達0.078μg/L，高于目前國內(nèi)報道的水平。特異性強，重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好。雙抗體夾心ELISA方法檢測臨床分離金葡菌腸毒素結(jié)果顯示，，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)中腸毒素的總帶毒率為93.9％，其中B型腸毒素帶毒率最高，占檢出的53.3％，其次為C型(28.5％)。甲氧西林敏感金葡菌的帶毒率僅為28.6％，兩者之間差異有統(tǒng)計學意義。重度燒傷病人血清中SEB水平明顯高于對照組及輕度燒傷組，差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論 制備了抗SEB-McAb，其效價較高，親和力較強，特異性強。在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA法檢測SEB，靈敏性達0.078μg/L，特異性和重復(fù)性均較好，可用于臨床分離菌株SEB的檢測以及檢測燒傷病人血清中的SEB。本方法為臨床金葡菌感染的診斷和分型，為闡明SEB的臨床意義提供了方法。
【圖文】：

圖2.1M:蛋白質(zhì)分子量標準;六株McAb(腹水)的SDS一PAGE分析:ZC一l:2:ICs;3:1凡;4:3A9;5:ID一;6:3D6圖2.2單抗的W七stem一blot分析M:蛋白質(zhì)分子量標準;:ZCll;

單抗的W七stem一blot分析
【學位授予單位】：第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R392.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 聶曉華;李建東;李煥榮;崔德鳳;張莉;;豬傳染性胃腸炎病毒S基因A位點蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2011年08期

2 韓秀娥;張萍;王雪峰;李萌;魏萍;周建華;尹杰超;;馬傳染性貧血病毒p26蛋白單克隆抗體的制備[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學報;2011年07期

3 王永志;蘇穎;米麗娟;付云紅;范志強;扈榮良;趙玉民;;山羊痘病毒p32基因的克隆、表達及單克隆抗體制備[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年09期

4 石星明;張晶;趙妍;王玫;魏秀英;胡順磊;全炎銘;閆帥;崔紅玉;王云峰;;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒gp90蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J];畜牧獸醫(yī)學報;2011年09期

5 于楊;崔佳瑩;丁晴微;崔鵬飛;李印;鄧國華;任濤;陳化蘭;;新城疫病毒HN蛋白單克隆抗體的制備[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年09期

6 回晶;肖芳;李輝;崔小進;劉宏生;胡風慶;;新型截短腸毒素C2突變株抑制腫瘤細胞生長(英文)[J];生物工程學報;2011年06期

7 李剛;紀憲勇;錢國良;華修德;秦娜;王杰;劉鳳權(quán);;抗吡蟲啉單克隆抗體的制備及鑒定[J];生物工程學報;2011年06期

8 張璐;劉寧寧;吳海珍;高繼明;肖一紅;周恩民;;非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重鏈B羧基端多肽單克隆抗體的制備及鑒定[J];中國獸醫(yī)科學;2011年07期

9 張倩;李曉霞;董昕欣;顧小雪;曹振;鄧小雨;胡冬梅;劉奇;周智;遇秀玲;翟新驗;田克恭;;豬細小病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國比較醫(yī)學雜志;2011年09期

10 姜金慶;張海棠;范國英;馬金友;王自良;王建華;;19-去甲睪酮單克隆抗體的篩選及icELISA方法的建立[J];科學通報;2011年20期

相關(guān)會議論文 前10條

1 徐爽;徐焱;;單克隆抗體在輸血領(lǐng)域的應(yīng)用探討[A];中國輸血1999年年會暨紀念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學術(shù)交流論文專輯[C];1999年

2 李安民;;單克隆抗體標載的~(131)I治療惡性腦膠質(zhì)瘤Ⅱ期臨床試驗的三種給藥途徑的研究[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術(shù)大會論文集[C];2003年

3 于翠;施曼鈴;王桂珍;吳建祥;周雪平;;幾種重要植物病毒單克隆抗體的制備和快速檢測方法的建立[A];第三次全國植物病毒和病毒防治學術(shù)研討會論文集[C];2003年

4 劉振勇;鄧國華;李呈軍;張立春;田國彬;何后軍;于康震;陳化蘭;;抗禽流感H9N2亞型血凝素特異性單克隆抗體的制備與分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

5 李振宇;趙益明;董寧征;沈飛;阮長耿;;抗FⅧ-C2區(qū)單克隆抗體的制備及鑒定[A];第11次中國實驗血液學會議論文匯編[C];2007年

6 張改連;黃烽;;抗CD20人鼠嵌合單克隆抗體rituximab治療類風濕關(guān)節(jié)炎的臨床研究[A];第十二屆全國風濕病學學術(shù)會議論文集[C];2007年

7 郝波;張國新;林艷;楊楊;王宏娣;;抗HCCR單克隆抗體的制備及其在肝癌檢測中的初步應(yīng)用[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 陶薇;楊連華;何卓晶;洪艷;陳勇;;抗戊型肝炎病毒重組蛋白單克隆抗體的制備和鑒定[A];浙江省醫(yī)學會醫(yī)學微生物與免疫學及醫(yī)學病毒學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

9 馬翠卿;郭奕陽;顧海燕;曾瑞紅;楊麗娟;魏林;;一株抗A族鏈球菌表面蛋白Fba的單克隆抗體對應(yīng)的表位與Fba結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白FH的位點重疊[A];河北省免疫學會第六次免疫學大會資料匯編[C];2010年

10 楊天兵;沈倍奮;;抗人重組白細胞介素1(rHIL-1)單克隆抗體的研制[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 文來;2010年單克隆抗體市場有望擴三倍[N];中國醫(yī)藥報;2005年

2 莊愉;單克隆抗體異軍突起[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

3 ;單克隆抗體異軍突起[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2003年

4 記者 尹暉;單克隆抗體研發(fā)進入新階段[N];無錫日報;2010年

5 尹暉;最大單克隆抗體研制項目在馬山奠基[N];無錫日報;2010年

6 記者 馬波;滇將建首家單克隆抗體基地[N];科技日報;2000年

7 ;單克隆抗體應(yīng)用前景看好[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 探微;單克隆抗體技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用初探[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 毛文波;單克隆抗體：征服癌癥的新方法[N];科技日報;2004年

10 勞云信;單克隆抗體 抗擊腫瘤的生力軍[N];中國醫(yī)藥報;2004年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 唐琳;肝再生增強因子與肝癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2005年

2 侯桂華;巨噬細胞移動抑制因子在同種移植排斥中作用及其機理的研究[D];山東大學;2004年

3 高勇;新型單克隆抗體熒光探針染料的合成及免疫熒光組織化學應(yīng)用[D];西北大學;2006年

4 江敏;大鼠單克隆抗體的制備、鑒定、基因克隆、抗原分析以及藥物偶聯(lián)物的抗腫瘤作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1996年

5 秦迎松;人促血液血管細胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）單克隆抗體的制備、鑒定及應(yīng)用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2004年

6 萬忠海;抗PEA單抗和單鏈抗體制備及在綠膿感染中的應(yīng)用[D];吉林大學;2008年

7 呂大偉;抗RANKL單克隆抗體在大鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎模型中的應(yīng)用及RANKL轉(zhuǎn)錄調(diào)控的探索性研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2011年

8 莊國洪;抗DR4、DR5單克隆抗體誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞株凋亡的研究[D];吉林大學;2004年

9 付建芳;溶藻弧菌抗獨特型抗體基因工程疫苗的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

10 王曉潔;對蝦白斑癥病毒快速檢測試劑盒的研制及其應(yīng)用[D];中國海洋大學;2005年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 馮亞軍;動物源金黃色葡萄球菌耐藥性檢測及其腸毒素A基因的克隆表達及單克隆抗體的制備[D];揚州大學;2009年

2 龍軍;金黃色葡萄球菌B型腸毒素單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

3 黃子逸;LIGHT基因轉(zhuǎn)染細胞株和單克隆抗體的研制及其對T細胞的共刺激效應(yīng)[D];蘇州大學;2010年

4 李鐵民;抗P-選擇素單克隆抗體對大鼠胰腺缺血再灌注損傷的作用實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2003年

5 李曉龍;肝癌相關(guān)抗原SMP30 mRNA在癌細胞中的表達及其單克隆抗體的制備[D];廣西醫(yī)科大學;2010年

6 鄭杰;分泌抗豬流感病毒（河南株）單克隆抗體雜交瘤細胞株的制備、鑒定和初步應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學;2004年

7 邵煒慧;鹽酸克倫特羅單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用[D];揚州大學;2005年

8 楊寧;納豆激酶的純化及其單克隆抗體的制備鑒定[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2005年

9 唐琦;抗麻痹性貝毒素GTX2，3單克隆抗體的制備及特性分析[D];暨南大學;2005年

10 賈娟娟;抗胰島素單克隆抗體的研制及酶聯(lián)免疫分析方法的建立[D];中國原子能科學研究院;2005年

本文編號：2680979