【摘要】： 在機體抗腫瘤及胞內感染（包括HIV）的免疫應答中，已證明細胞毒 性T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）介導的特異性細胞免疫是 一類重要的免疫效應機制。因此，有效地激發(fā)CTL就成為當今疫苗研制領 域的一個重要課題，也是發(fā)展新型預防性和治療性抗腫瘤、抗胞內感染疫 苗的關鍵所在。新近的疫苗學研究表明，某種疫苗接種機體后能否有效激 發(fā)CTL的關鍵環(huán)節(jié)在于：這些疫苗抗原能否有效地被局部專職性抗原遞呈 細胞（professional antigen-presenting cells，pAPCs）［尤其樹突狀細胞 （dendritic cells，DC）］捕獲、轉運到鄰近淋巴結，并進入這些pAPC的 MHCⅠ類抗原遞呈途徑，最終以“多肽-MHCⅠ類分子復合物”形式呈現(xiàn) 于細胞表面供特異性初始型CD8+T細胞（naive CD8~+ T cells）識別。有關 研究表明，顆粒性抗原遞送系統(tǒng)（疫苗）常易于被外周的DC捕獲并經交 叉遞呈（cross-presentation）進入其MHCⅠ類抗原遞呈途徑，進而交叉激 活（cross-priming）特異性初始CD8~+T細胞，如免疫刺激復合物 （immune-stimulating complexes，ISCOMs）、含有CTL表位的病毒樣顆粒 （virus-like particles，VLPs）、噬菌體或細菌顆粒、包被有抗原肽的微粒等 等。另一方面，大量研究表明聯(lián)合應用細胞因子等免疫調節(jié)分子的重組蛋 白或其表達質粒作為佐劑，�？擅黠@增強疫苗激活CTL的效應；眾多細胞 因子中，小鼠IL-12已被證明在體內常可明顯促進CTL應答的發(fā)生，是一 種有效的Th1型佐劑。 目前，基于CTL表位的多肽疫苗已被用來進一步研制安全、高效性疫 苗，但研究表明：單純合成多肽性疫苗在體內常難以有效地激發(fā)CTL應答。 本課題結合表位多肽疫苗設計和基因治療領域中陽離子肽類DNA轉運載 體（cationic peptides DNA delivery systems）的研究進展，提出一種新型顆 粒性CTL疫苗設計方案一“模擬病毒”（Mimovirus），它是一種病毒大 小的顆粒型疫苗。其中，陽離子肽類DNA轉運載體為一些富含正電荷氨 基酸的多肽，如寡聚賴氨酸中，［K］＊，它們可通過電性中和作用 與富含負電荷（磷酸根基團）的質粒DNA發(fā)生聚合、壓縮，從而將直徑 約數(shù)百納米、松散的質粒DNA聚縮成為幾十納米的致密顆粒，使之易于 被真核細胞攝入并保護DNA免于核酸酶的降解，如此達到基因轉染的目 的。 本研究采用分子設計的路線，，設計合成了一個由18個賴氨酸和一個 CTL表位（HBSAg28．39，H｛叫制性）組成的富正電荷線形多肽。該多肽 與小鼠含 IL八 基因的質粒 pIL4 在適當?shù)碾姾杀壤�，通過電性中和作用 可自組織形成一定大小的顆粒。該種顆粒直徑與天然病毒相近：其眾多重 復性抗原多肽“包裝”一個質粒DNA的結構也與天然病毒衣殼蛋白包被 病毒核酸相似；而且該顆粒一定程度上可模擬天然病毒被pAPCS等免疫細 胞捕獲的過程，甚至可通過其轉染活性直接“感染” pAPCS等兔疫細胞， 進而在體內可能激發(fā)類似的兔疫效應，正是基于這些與天然病毒的類似之 處，我們將這種顆粒性巨分子抗原稱為“模擬病毒’＼mimovirus人本課題 通過DNA阻滯實驗和透射電子顯微鏡（負染法）鑒定了“模擬病毒”顆 粒的形成；用ELtSA證明“模擬病毒”在體外可以轉染P815細胞，且當 多肽／DNA電荷比值N＝4刀時出現(xiàn)較高的轉染效率；用“模擬病毒”尾根 部皮下兔疫小鼠，然后用標準的’℃r釋放法檢測特異性 CTL應答，證明 “模擬病毒”在小鼠體內成功誘發(fā)了HBSAg 2s。39特異性CTL應答，進一 步分析表明“模擬病毒”的顆粒性質和 IL．12基因的轉染活性是其有效誘 發(fā)CTL應答的必要條件。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R392.11

【參考文獻】

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2 萬瑛,吳玉章,邊疆,王祥智,周偉,賈正才,唐燕,周麗蕓;噬菌體呈現(xiàn)疫苗誘導乙型肝炎病毒特異性細胞毒性T細胞反應[J];第三軍醫(yī)大學學報;2000年10期

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本文編號：2680867